2024-11-20
 |
-
T4 DNA Ligase催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'-磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵。酶還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但是該酶對(duì)單鏈核酸無(wú)酶活性。T4 DNA Ligase需要輔因子ATP。
特點(diǎn)- 快速–室溫下10分鐘內(nèi)完成粘末端的連接反應(yīng)。
- 該酶在Thermo Scientific限制性?xún)?nèi)切酶、PCR和RT緩沖液(添加ATP)中有活性。
- 配套提供聚乙二醇溶液，以高效進(jìn)行平末端連接。
應(yīng)用- 克隆酶切產(chǎn)生的DNA片段。
- 克隆PCR產(chǎn)物。
- 連接雙鏈寡聚核苷酸街頭或連接物。
- 定點(diǎn)誘變。
- 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性 (AFLP)。
- 連接酶介導(dǎo)的 RNA 檢測(cè)。
- 雙鏈DNA，RNA 或 DNA/RNA 復(fù)合體中缺口的修復(fù)。
- 線性DNA自身環(huán)化。
濃度1 Weiss u/µl = 200 CEU*/µl
5 Weiss u/µl = 1000 CEU*/µl
30 Weiss u/µl = 6000 CEU*/µl
* 一個(gè)粘性末端連接單位的是指在16°C 、30分鐘內(nèi)50%連接HindIII酶切的lamda DNA產(chǎn)物所需要的酶的量。來(lái)源含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌。分子量55.3 kDa，單體。活性單位定義1個(gè)活性單位是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中，37°C、20分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量。1個(gè)Weiss單位相當(dāng)于約200個(gè)粘性末端連接單位。酶活性分析混合物：66 mM Tris-HCl (pH 7.6), 6.6 mM MgCl2, 0.066 mM ATP, 10 mM DTT, 3.3 micro Mol [32PPi]
保存緩沖液保存緩沖液組分：
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM DTT, 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA和50% (v/v)甘油。10X T4 DNA Ligase 緩沖液(#B69)400 mM Tris-HCl, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 5 mM ATP (pH 7.8, 25°C)。質(zhì)量控制相關(guān)測(cè)試表明無(wú)內(nèi)切和外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。 功能檢測(cè)：粘性末端或平末端DNA的連接能力。抑制與失活- 抑制劑：當(dāng)反應(yīng)體系中NaCl或KCl的濃度超過(guò)200??mM時(shí)，可強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase活性。
- 失活：65°C加熱10分鐘或者70°C加熱5分鐘。
備注
- 聚乙二醇(PEG) 極大地增加平末端連接效率 (5) 。反應(yīng)體系中的PEG 4000的建議濃度為5% (w/v)。
- T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會(huì)改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率。為避免此現(xiàn)象，電泳前需處理樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)。樣本處理方法如下：樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)與Fermentas公司6X DNA Loading Dye & SDS溶液(#R1151)混合；70°C加熱5分鐘或65°C加熱10分鐘后冰浴保存。
- 轉(zhuǎn)化時(shí)，連接產(chǎn)物的體積不能超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的10%。
- 電轉(zhuǎn)化之前，先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase。然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物。
訂購(gòu)信息：貨號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 規(guī)格 EL0014 T4 DNA Ligase (5 Weiss U/µL) 200 U EL0011 T4 DNA Ligase (5 Weiss U/µL) 1,000 U EL0012 T4 DNA Ligase (5 Weiss U/µL) 5 x 1,000 U EL0013 T4 DNA Ligase, HC (30 U/µL) 5000 U EL0016 T4 DNA Ligase, LC (1 U/µL) 2x500 U
了解更多信息，/order/catalog/product/EL0011。
查看
免責(zé)聲明：以上所展示的信息由企業(yè)自行提供，內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由發(fā)布企業(yè)負(fù)責(zé)，化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司
- 類(lèi)型：
- 生產(chǎn)廠家
- 聯(lián) 系 人：
- 賽默飛世爾科技
聯(lián)系我時(shí)，請(qǐng)說(shuō)明在化工儀器網(wǎng)上看到的，謝謝。
相關(guān)供應(yīng)
- Multiskan FC酶標(biāo)儀 賽默飛 51119080
- Thermo熱電 Multiskan FC酶標(biāo)儀
- 賽默飛 Multiskan FC酶標(biāo)儀 51119080
- Multiskan™ FC 酶標(biāo)儀
- Varioskan LUX 多功能酶標(biāo)儀
- Multiskan Sky 全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀
- Fluoroskan 熒光讀數(shù)儀和 Luminoskan
- HD-SY96B-多功能酶標(biāo)分析儀
- HD-SY96B-全自動(dòng)酶標(biāo)儀
- HD-SY96B-酶聯(lián)免疫分析儀
- HD-SY96B-酶標(biāo)分析儀
- HD-SY96B-酶標(biāo)儀
采購(gòu)中心