原位雜交(FISH雙標(biāo))
- 公司名稱 上海信帆生物科技有限公司
- 品牌 GEMIG
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/11/25 10:34:45
- 訪問次數(shù) 804
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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服務(wù)介紹:
原位雜交原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交,從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進行。
原位雜交(FISH雙標(biāo))可以檢測兩個靶基因的共定位情況。
名稱 | 規(guī)格 |
原位雜交(FISH雙標(biāo)) | 張 |
實驗流程:
細胞爬片熒光探針原位雜交雙標(biāo)實驗步驟
1、細胞爬片固定:細胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min,于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
2、消化:基因筆畫圈,根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。.
3、預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液37°恒溫箱1h。
4、雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針1雜交液,37度雜交過夜。
5、雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌
6、雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針2雜交液,37度雜交過夜。
7、DAPI復(fù)染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
8、鏡檢拍照:切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm,發(fā)藍光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555 nm,發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm,發(fā)紅光。)
送樣要求:
1、切片前處理要求:新鮮組織干冰運輸后做冰凍切片;或取2mm左右厚度的新鮮組織,5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定,4℃低溫保存運輸,切勿冷凍結(jié)冰,盡快包埋切片后進行原位雜交實驗,固定時間過長影響核酸檢出率;
2、冰凍切片:冰凍切片-20℃運輸;
3、石蠟切片:石蠟切片常溫運輸;
4、細胞爬片:細胞爬片加原位雜交固定液固定15min后,換無酶PBS,密封,4℃運輸。
單據(jù)填寫:
1、探針合成:需提供待測目的基因序列或基因登錄號、所需標(biāo)記類型;
2、自帶探針需告知完整探針信息;
3、寫明檢測要求。