細(xì)胞名稱  鯽魚腦星形膠質(zhì)細(xì)胞系；CAA圖片
形態(tài)特性 上皮樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。

培養(yǎng)條件 10%FBS

傳代方法 無

傳代情況 1：

3傳代，3-4天傳1次  

凍存條件 C5

支原體檢測(cè) 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

STR 陰性　

同工酶

染色體 未做

使用權(quán)限

鯽魚腦星形膠質(zhì)細(xì)胞系；CAA圖片操作流程：

※主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡），co2孵箱。
※細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
  ?細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng):從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時(shí)不斷搖動(dòng)使之迅速融化，然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
  ?細(xì)胞傳代:原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
  ?細(xì)胞形態(tài)的觀察:在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
  ?生長曲線:取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
  ?細(xì)胞的貼壁率:指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
   ?細(xì)胞的計(jì)數(shù):常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。

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