周期素E重組兔單克隆抗體
- 公司名稱 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
- 品牌 ATCC
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 國(guó)產(chǎn)
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2023/4/17 10:48:15
- 訪問(wèn)次數(shù) 302
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50ul、100ul |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,生物產(chǎn)業(yè) | 主要用途 | 科研 |
| 英文名稱 | Cyclin E1 | 抗體來(lái)源 | Rabbit |
| 濃度 | 1mg/ml | 保存條件 | Shippedat4℃.Storeat-20℃ |
詳細(xì)介紹：
中文名稱 | 抗體來(lái)源 | 規(guī)格 | 英文名稱 |
Rabbit | 50ul、100ul | Cyclin E1 |
英文名稱：Cyclin E1
英文別名:CCNE1;CCNE;CCNE1;CyclinEs;CyclinEt;CyclinE;G1/SspecificcyclinE;G1/S-specificcyclin-E1;CCNE1_HUMAN;pCCNE1.
交叉反應(yīng):Human, Mouse
標(biāo)記:Unconjugated
抗體來(lái)源:Rabbit
抗體類型:Monoclonal
克隆號(hào):4H7
免疫原:RecombinanthumanCyclinE1protein(100-200aa)
蛋白細(xì)胞定位:細(xì)胞核
純化方法:affinitypurifiedbyProteinA
亞型:IgG
性狀:Liquid
濃度:1mg/ml
儲(chǔ)存液:0.01MTBS(pH7.4)with1%BSA,0.03%Proclin300and50%Glycerol.
保存條件:Shippedat4℃.Storeat-20°Cforoneyear.Avoidrepeatedfreeze/thawcycles.
公司產(chǎn)品僅用于科研
抗體制備過(guò)程：
1.材料與試劑
a．提取的動(dòng)物 Ig
b．弗氏佐劑和弗氏佐劑
d．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
e．其它材料及試劑
2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。
3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。
4、試取血樣進(jìn)行測(cè)試，查看免疫效果。
5、如果免疫成功，殺死實(shí)驗(yàn)活體，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清（無(wú)菌采制）
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操作步驟:
1.脫蠟水化。將石蠟切片置于新鮮二甲苯脫中浸泡 15 分鐘,重復(fù)三次。去除多余的液體后,依次置于無(wú)水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇,各浸泡 5 分鐘,蒸餾水(或自來(lái)水)沖洗 5 分鐘。用 PBS 緩沖液(試劑 1,將干粉溶解于 1L 去離子水中)沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。
2.抗原修復(fù)。將脫蠟水化后的組織切片置于燒杯(或修復(fù)盒)中的耐高溫塑料切片架上,加適量修復(fù)液 1× 檸檬酸鈉抗原修復(fù)液(試劑 2,將 100×檸檬酸鈉抗原修復(fù)液加去離子水稀釋成 1×檸檬酸鈉抗原修復(fù)液),液面要浸過(guò)切片組織一定高度,將修復(fù)盒置于沸水中煮沸修復(fù) 15 分鐘后取出玻片,自然涼至室溫。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。
注意:抗原修復(fù)時(shí),修復(fù)液務(wù)必保證切片始終浸泡在液體內(nèi),一般情況:修復(fù)液的量約為 800mL/1 架。
3.阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。用吸水紙擦干玻片,免疫組化筆在組織周圍畫圈,滴加 50μL 內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑(試劑 3)到切片組織上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育 30 分鐘,用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。
4.血清封閉。用吸水紙擦干玻片,滴加 50μL 正常山羊血清工作液(試劑 5),37℃封閉 20 分鐘,以減少非
特異性染色。
5.一抗孵育。用抗體稀釋液(試劑 4)將一抗原液稀釋成工作液,用吸水紙擦干玻片組織周圍的液體,滴加適量抗體工作液,置于濕盒 4℃孵育過(guò)夜或 37℃孵育 1h-2h。
6.復(fù)溫。4℃過(guò)夜后從冰箱拿出樣本,在室溫下孵育 15min 復(fù)溫(抗體孵育為 4℃過(guò)夜選用此步驟,如室溫孵育直接進(jìn)入下一步清洗)。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。
7.二抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 標(biāo)記的羊抗兔 IgG(試劑 6),37℃孵育 20 分鐘,用 PBS
緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。
8.三抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素孵育(試劑 7),37℃孵育 20 分鐘,用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。
9.顯色。甩去 PBS 緩沖液,吸水紙擦干切片; 每張切片滴加新鮮配制的 DAB 工作液 50μL(試劑 8:試劑 9:試劑 1=1:1:18 比例配置),孵育 3-5min,光學(xué)顯微鏡下觀察染色結(jié)果,切勿顯色過(guò)深;顯色后用自來(lái)水沖洗切片終止顯色。
10.復(fù)染。滴加適量蘇木素染液(試劑 10)復(fù)染,孵育 1-5 分鐘,自來(lái)水沖洗 5 分鐘,滴加鹽酸酒精分化
液分化30秒,自來(lái)水沖洗。
11.脫水封片。將玻片依次置于 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇,各浸泡5分鐘, 再將玻片放入二甲苯中浸泡 15 分鐘,重復(fù)三次。玻片取出來(lái)稍晾干,用中性樹膠封片。
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