寨卡病毒IgM檢測試劑盒

通用名稱：寨卡病毒IgM ELISA試劑盒（捕獲法）
英文名稱：ZIKV DetectTM22.0  IgM Capture ELISA
產(chǎn)品規(guī)格：96T
產(chǎn)品貨號：900223
產(chǎn)品品牌：美國Inbios

預(yù)期用途

此檢測試劑盒用于定性檢測人血清中抗寨卡病毒IgM抗體。還檢測符合疾病控制中心和預(yù)防中心（CDC）臨床和/或流行病學(xué)標準。僅用于科研，不作臨床診斷。

檢測原理

這一試劑盒是一種酶聯(lián)捕獲免疫測定法，用于檢測靶向ZIKV包膜糖蛋白的人類IgM抗體。微量滴定孔預(yù)包被有抗人IgM的多克隆捕獲抗體。將陽性質(zhì)控，陰性質(zhì)控和未知測試樣品用樣品稀釋緩沖液稀釋，然后加入適當位置的孔中。溫育和洗滌后，分別加入即用型（RTU）ZIKV抗原（Zika Ag），交叉反應(yīng)性質(zhì)控抗原（CCA）和正常細胞抗原（NCA）到每個相應(yīng)的孔中。

溫育和洗滌后，將每種孔中加入即用型二抗溶液。在隨后的溫育和洗滌步驟后，將包含辣根過氧化物酶標記的抗小鼠抗體的酶聯(lián)物溶液加入到每個孔中。洗滌后，將孔與四甲基聯(lián)本胺（TMB）底物孵育。然后加入酸性終止溶液，并通過450nm處的吸光度測量來確定結(jié)果。如果存在靶向ZIKV包膜糖蛋白的人IgM抗體，則形成由IgM，抗原，第二抗體和酶聯(lián)物組成的復(fù)合物。如果靶向ZIKV包膜糖蛋白的IgM抗體不存在，則將抗原，抗體和酶聯(lián)物洗掉。結(jié)果分析包括原始OD450值和比較樣品與給定抗原的反應(yīng)性以正確分類樣品的比率。

寨卡病毒IgM檢測試劑盒組成成分
1、微孔板——12 x 8——用對人IgM特異的捕獲抗體預(yù)包被。
2、陰性質(zhì)控——1x50ul——用于驗證實驗的有效性，使用前短暫離心以去除任何的沉淀物。
3、陽性質(zhì)控——1x50ul——用于驗證實驗的有效性，使用前短暫離心已去除任何的沉淀物。
4、樣品稀釋液——1x25mL——用于稀釋所有的血清樣本和質(zhì)控品。在2-8℃儲存，效期內(nèi)有效。
5、即用型寨卡病毒重組抗原——1x3mL——該瓶含有包含Zika包膜糖蛋白的即用型（RTU）ZIKV抗原（Zika Ag）。
6、交叉反應(yīng)質(zhì)控抗原（CCA）——1x3mL——含可交叉反應(yīng)的質(zhì)控抗原。有助于結(jié)果解釋。
7、正常質(zhì)控抗原（NCA）——1x3mL——含正常質(zhì)控抗原，有助于結(jié)果解釋。
8、即用型二抗——1x9mL——含有靶向黃病毒抗原的二抗。
9、酶聯(lián)物濃縮液（100 x）——1x150ul——含有HRP標記的抗鼠抗體，使用前充分混勻，在酶聯(lián)物稀釋液中稀釋。
10、酶聯(lián)物稀釋液——1x9mL——用來稀釋酶聯(lián)物濃縮液。
11、洗滌濃縮液（10 x）——1x120mL
12、底物液——1x12mL——對光敏感。
13、終止液——1x9mL——用來終止反應(yīng)。


檢測步驟
1、陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控針對于Zika Ag、CCA和NCA三種抗原須做雙孔檢測，而樣品只做單孔檢測即可。
2、將板條做好標記。詳見“排版示例”。
3、按照標記好的微孔，每孔加入50ul相應(yīng)的陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控和樣品，注意避免產(chǎn)生氣泡。
4、完成后蓋上保鮮膜。
5、放在37℃（±2℃）溫育箱中溫育1小時（±5分鐘）。注意：微孔板不能疊加放置溫育，必須單獨平鋪進行溫育，不能使用CO2或其他氣體的溫育箱進行溫育。不能將微孔板放置在任何潮濕的物品上。
6、溫育完成后，用洗板機每次每孔300ul洗滌液洗板，共洗6次。
7、按照之前的分布，使用多通道移液器每孔加入50ul的Zika Ag、CCA及NCA，詳見示例排版。
8、重復(fù)步驟4
9、重復(fù)步驟5
10、重復(fù)步驟6
11、使用多通道移液器，每孔加入50ul即用型的二抗。
12、重復(fù)步驟4
13、重讀步驟5（孵育時間為30min）
14、重復(fù)步驟6
15、使用酶聯(lián)物稀釋液1:100倍稀釋酶聯(lián)物，按照需要的量配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。
16、使用多通道移液器，每孔加入50ul新鮮配制的酶聯(lián)物
17、重復(fù)步驟4
18、重讀步驟5（孵育時間為30min）
19、重復(fù)步驟6
20、使用多通道移液器，每孔加入75ul的TMB底物液
21、室溫（20-25℃）避光溫育20分鐘，無需封板。
22、使用多通道移液器，每孔加入50ul的終止液，室溫溫育至少1分鐘。30min內(nèi)讀取OD值，超過30min會影響實驗結(jié)果。
23、450nm處酶標儀讀數(shù)。注意：請勿對空白孔或空白值調(diào)零，不能使用參考波長。否則會導(dǎo)致CCA和NCA的值降低和不正確的ISR值。

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