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分子克隆實(shí)驗(yàn)
| 參考價(jià) | ￥ 1000 |
| 訂貨量 | ≥1 件 |
- 公司名稱 上海達(dá)為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2022/12/22 16:03:18
- 訪問(wèn)次數(shù) 1225
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| 產(chǎn)地類別 | 國(guó)產(chǎn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
分子克隆實(shí)驗(yàn)與質(zhì)粒載體構(gòu)建
一、服務(wù)介紹
分子克隆實(shí)驗(yàn)是在分子水平上提供一種純化和擴(kuò)增特定DNA的片段的方法。常含有目的基因，用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過(guò)轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式，引入適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增，然后再?gòu)暮Y選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴(kuò)增。
二、實(shí)驗(yàn)原理
外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中，將分別經(jīng)酶切的載體分子與外源DNA分子進(jìn)行連接。DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個(gè)帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能，而且T4噬菌體DNA連接酶還有—種大腸桿菌連接酶沒(méi)有的特性，即能使兩個(gè)平末端的雙鏈DNA分子連接起來(lái)。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低，一般可通過(guò)提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來(lái)提高平末端的連接效率。
T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應(yīng)分為3步：，T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶—AMP復(fù)合物；然后，酶—AMP復(fù)合物再結(jié)合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化；后產(chǎn)生一個(gè)新的磷酸二酯鍵，把切口封起來(lái)。
DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法，為了防止載體本身的自連，可以通過(guò)(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。
連接反應(yīng)的溫度在37℃時(shí)有利于連接酶的活性.但是在這個(gè)溫度下，粘性末端的氫鍵結(jié)合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個(gè)折中溫度，即12-16℃，連接12-16h(過(guò)夜)，這樣既可大限度地發(fā)揮連接酶的活性，又兼顧到短暫配對(duì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。
三、實(shí)驗(yàn)流程
目的DNA的擴(kuò)增和純化；
連接反應(yīng)；
電泳檢測(cè)連接產(chǎn)物。
四、客戶提供
樣本DNA，基因序列，試劑盒。
上海達(dá)為科生物科技有限公司，位于上海長(zhǎng)江軟件園，實(shí)驗(yàn)室面積600多平方米。我們擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室、先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和經(jīng)驗(yàn)豐富的科研技術(shù)人員。公司目前具備較好的生物學(xué)、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，能夠?yàn)閺V大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測(cè)、合作研究、開(kāi)發(fā)及生產(chǎn)服務(wù)。
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