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          克隆形成實驗

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          細胞實驗克隆形成細胞增殖

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             上海達為科生物科技有限公司,位于上海長江軟件園,公司目前具備較好的生物學(xué)、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺,能夠為廣大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測、合作研究、開發(fā)及生產(chǎn)服務(wù)。

          公司擁有專業(yè)的實驗室、先進的實驗設(shè)備和經(jīng)驗豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團隊包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測、基因檢測等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。通過高度細分、較好的服務(wù)平臺,為廣大客戶提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù)。目前,,涉及臨床醫(yī)學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。

          我們的目標(biāo)是為了使您的工作更輕松、更快捷。為了實現(xiàn)一站式服務(wù)我們不斷更新實驗方法和引進新的產(chǎn)品,控制和降低各種成本,為您的研究加油。這既是一項長期而艱巨的工作,又是一項光榮的工作,同時也是我們企業(yè)發(fā)展的動力源泉。

           

           

           

           

          制作動物模型 細胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測 病理學(xué)形態(tài)檢測 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具、一次性耗材等

          應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
           
          實驗步驟

           

          1.取對數(shù)生長期的各組細胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞,并把細胞懸浮在10%胎牛血清的細胞生長培養(yǎng)基中備用。

           

          2.將細胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋,每組細胞每皿分別接種100個細胞于含10ml 37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中,并輕輕轉(zhuǎn)動,使細胞分散均勻。

          3.置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周。

          4.當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時,終止培養(yǎng)。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。

          5.加純甲醇或1:3醋酸/甲醇5ml,固定15分鐘。

          6.去固定液,加適量Giemsa應(yīng)用染色液染10~30分鐘

          7.用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。

          8.將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片,用肉眼直接計數(shù)克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數(shù)大于10個細胞的克隆數(shù)。后計算克隆形成率。

          克隆形成率=(克隆數(shù)/接種細胞數(shù))×100%

          9.平板克隆形成試驗方法簡單,適用于貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關(guān)鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好,不能有細胞團,接種密度不能過大。



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