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細(xì)胞周期檢測(cè)技術(shù)服務(wù)
- 公司名稱 伊萊博生物科技（上海）有限公司
- 品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2023/10/30 17:03:06
- 訪問次數(shù) 640
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細(xì)胞周期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)共分以下4個(gè)主要步驟:
1.細(xì)胞鋪盤
HeLa S3細(xì)胞，密度為80%左右分盤 ，使鋪盤密度在50%左右，為滿足流式細(xì)胞儀上機(jī)要求，細(xì)胞數(shù)目需大于1x10°/組。
2.細(xì)胞同步化處理 :
a) 加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h
b) 用溫育的PBS洗4次，更換新鮮培養(yǎng)基，培養(yǎng)9h
c) 再加入2mM Thymidine再次同步化18h后
3.樣品收集;
a) 分別收取釋放2h(S期)，6h(G2/M期)和12h(G1期)細(xì)胞樣品
b) 每個(gè)樣品收取都使用預(yù)冷的PBS洗滌4次，1000g離心5min，棄上清
C)100ULPBS審懸沉促，吸取出細(xì)胞懸液干移液器中，干移去細(xì)胞的管中加入900uL預(yù)冷的70%一醇，漩渦振蕩器需蕩中滴入細(xì)胞懸液。
d)4℃固定一小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。
e)1500rmp，離心10min，去固定液。
f)細(xì)胞染色液配制:50xRNaseA母液:50xPI母液:PBS=20:20:960;RNaseA母液濃度1mg/mL，工作濃度20ug/mL;PI母液濃度2.5mg/mL，工作濃度50ug/mL。
g)細(xì)胞37度染色1h。根據(jù)細(xì)胞量，加入一定體積的細(xì)胞染色液(1~1.5mL)重懸，使上機(jī)時(shí)細(xì)胞通過率為200~350Cell/s,染色液不可過多或過少，過多則細(xì)胞密度過低上機(jī)速度嚴(yán)重不足，過少則導(dǎo)致細(xì)胞粘結(jié)。
h) 300目篩網(wǎng)過濾至流式管中。
4.上機(jī)檢測(cè);
流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)，計(jì)數(shù)50000個(gè)細(xì)胞。
5.同步化數(shù)據(jù)分析
數(shù)據(jù)使用ModFit軟件分析。
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