藥用級玉米朊藥典標(biāo)準(zhǔn)CDE登記有資質(zhì)

藥用級玉米朊藥典標(biāo)準(zhǔn)CDE登記有資質(zhì)

玉米朊

Yumiruan

Zein

　　[9010-66-6]

　　本品系從玉米麩質(zhì)中提取所得的醇溶性蛋白。按干燥品計算，含氮（N）量應(yīng)為13.1%～17.0%。

　　【性狀】本品為黃色或淡黃色薄片，一面具有一定的光澤；或?yàn)辄S色或淡黃色粉末。

　　本品在80%～92%乙醇或70%～80%丙酮中易溶，在水或無水乙醇中不溶。

　　【鑒別】（1）取本品約20mg，剪碎，加90%乙醇2ml使溶解，加10%醋酸鉛溶液2ml，即產(chǎn)生白色沉淀。

　?。?/span>2）取本品約0.1g，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml和硫酸銅試液數(shù)滴，置水浴中加熱，即變?yōu)樽仙?/span>

　?。?/span>3）取本品約25mg，滴加硝酸1ml，用力振搖，溶液變成亮黃色，再加6mol/L氨水10ml，溶液即變?yōu)槌赛S色。

　?。?/span>4）取本品10mg，置10ml離心管中，加溶劑（取異丙醇55ml，β-巰基乙醇2ml，加水至100ml）10ml，用渦旋混合器混合振蕩使樣品全溶解，再以每分鐘11 000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，取上清液作為供試品貯備液，取供試品貯備液與緩沖液（取三羥甲基氨基甲烷6.0g，加水70ml，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6.8，加丙三醇20ml，十二烷基硫酸鈉4.0g，溴酚藍(lán)0.005g，加水至100ml）（1：1）混合，將混合溶液置于密封的微量離心管中95℃放置10分鐘，再置冰浴中冷卻，作為供試品溶液。取合適的含有10～190kDa或10～l00kDa蛋白條帶的分子量標(biāo)記物（蛋白標(biāo)準(zhǔn)品可商業(yè)購買）與緩沖液（1：1）混合，將混合溶液置于密封的微量離心管中95℃放置10分鐘，再置冰浴中冷卻，作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。分別取標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液與供試品溶液各10μl（上樣量約為5μg），照電泳法（通則0541第五法）測定，分離膠溶液為30%丙烯酰胺溶液（取丙烯酰胺60g與亞甲基雙丙烯酰胺1.6g，加水至200ml，濾紙濾過，避光保存）-分離膠緩沖液（取三羥甲基氨基甲烷36.3g，加適量水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8，加水稀釋至100ml）-20%十二烷基硫酸鈉溶液-10%過硫酸銨溶液（臨用新配）-四甲基乙二胺-水（3.5：1.5：0.08：0.1：0.01：5.3），電壓為100V，運(yùn)行時間為2.5小時或前沿到達(dá)凝膠頂部。以標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量的對數(shù)為縱坐標(biāo)，相對遷移率為橫坐標(biāo)，計算回歸方程，供試品在19～26kDa應(yīng)含有兩個主要的蛋白質(zhì)帶。