ODIPY™ 581/591 十一烷酸可用于檢測細胞和細胞膜中的活性氧 (ROS)。 染料的多不飽和丁二烯基部分的氧化導(dǎo)致熒光發(fā)射峰從～590 nm移動到～510 nm。 在還原狀態(tài)下，BODIPY™ 581/591 十一烷酸的激發(fā)和發(fā)射值為 581/591 nm； 氧化后，激發(fā)和發(fā)射值移至 488/510 nm。

該產(chǎn)品我們建議用高質(zhì)量無水 DMSO 溶解，母液濃度 1 至 10 mM，≤?20°C 避光保存。

BODIPY™ 581/591 C11 檢測脂質(zhì)過氧化的原理

BODIPY™ 581/591 C11的分子結(jié)構(gòu)如圖2所示，染料的多不飽和丁二烯基部分（紅色虛線框）可與ROS發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致染料的熒光發(fā)射峰從～590 nm移動到～510 nm。 在還原狀態(tài)下，BODIPY™ 581/591 C11的激發(fā)和發(fā)射值為 581/591 nm，呈現(xiàn)紅色熒光； 經(jīng)氧化后，激發(fā)和發(fā)射值移至 488/510 nm，呈現(xiàn)出綠色熒光。

圖2. BODIPY™ 581/591 C11 檢測脂質(zhì)過氧化的原理²

BODIPY™ 581/591 C11染料使用方法

染料溶解與保存：

BODIPY™ 581/591 C11的分子量為504.4 g/mol。1 mg染料可以使用198 µl 高質(zhì)量無水DMSO溶解成10 mM母液，溶解好的母液于-20 ℃分裝避光保存，避免反復(fù)凍融。

染色流程：

染料的推薦工作液濃度為1-10 µM，可以使用培養(yǎng)基進行稀釋，孵育時間建議為30分鐘，的工作濃度和孵育時間需要根據(jù)實驗體系進行調(diào)整。具體染色流程請參考圖3。

圖3. BODIPY™ 581/591 C11染料使用流程

BODIPY™ 581/591 C11結(jié)果分析

BODIPY™ 581/591 C11適用于多種分析方法（流式細胞儀、熒光顯微鏡、高內(nèi)涵），比較常用的是流式細胞儀和熒光顯微鏡。下面，我們分別以這兩種檢測平臺為例，介紹一下結(jié)果分析方法。根據(jù)染料的光譜性質(zhì)，我們可以使用以下通道來進行檢測：

*在使用流式細胞儀檢測還原態(tài)時，需要使用561nm激光器激發(fā)的PE通道來檢測。對于PE通道使用488nm激光器激發(fā)的流式細胞儀，建議只檢測FITC通道的信號（如同時檢測FITC和PE通道，兩個通道之間存在干擾，導(dǎo)致結(jié)果不準確），這也是大多數(shù)文獻中所使用的方法。

流式細胞儀檢測結(jié)果

典型的流式數(shù)據(jù)如圖4所示,僅使用FITC通道檢測氧化態(tài)，使用直方圖對數(shù)據(jù)進行分析。與對照組對比，經(jīng)誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化后，染料氧化態(tài)增加，F(xiàn)ITC通道熒光強度增強，信號峰右移（圖4A），也可以對氧化態(tài)平均熒光強度進行統(tǒng)計比較（圖4B）。

圖4. BODIPY™ 581/591 C11檢測脂質(zhì)過氧化流式結(jié)果分析

 Hypoxia–reoxygenation (HR)誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化，RLX處理抑制脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)生。³

熒光顯微鏡檢測結(jié)果

典型的熒光顯微鏡成像結(jié)果如圖5所示，分別使用FITC和Texas Red通道來檢測染料的氧化態(tài)和還原態(tài)。經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化后，綠色信號增強（圖5A）。在統(tǒng)計時，使用氧化態(tài)與還原態(tài)熒光強度的比值來對不同的實驗組進行比較（圖5B）。氧化態(tài)/還原態(tài)比值越高，說明脂質(zhì)過氧化程度越高。

圖5. BODIPY™ 581/591 C11檢測脂質(zhì)過氧化成像結(jié)果分析⁴

脂質(zhì)過氧化染料常見問題解析

問：BODIPY™ 581/591 C11熒光探針可以兼容固定嗎？

答：BODIPY™ 581/591 C11熒光探針適用于活細胞檢測，不兼容固定。此外，該染料也不能用于固定后的樣品。

問：樣品中含有GFP熒光蛋白，還可以使用BODIPY™ 581/591 C11熒光探針嗎？如不能，有其他產(chǎn)品推薦嗎？

答：由于BODIPY™ 581/591 C11熒光探針在氧化態(tài)時呈現(xiàn)綠色，與細胞中的GFP沖突，因此不建議在含有GFP的樣品中使用此探針檢測脂質(zhì)過氧化。向您推薦B3932，其可以兼容GFP，在還原態(tài)時，激發(fā)和發(fā)射光波長分別為665/676 nm，被氧化后激發(fā)和發(fā)射光波長會變成580/605 nm。

參考文獻

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2. Wang, F., Naowarojna, N., & Zou, Y. (2022). Stratifying ferroptosis sensitivity in cells and mouse tissues by photochemical activation of lipid peroxidation and fluorescent imaging. STAR Protocols, 3(2), 101189. 

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4. Murray, M. B., Leak, L. B., Lee, W. C., & Dixon, S. J. (2023). Protocol for detection of ferroptosis in cultured cells. STAR Protocols, 4(3), 102457.