激光共聚焦成像是一項非常成熟的技術(shù)，隨著光譜式檢測方法成為共聚焦成像的主流，對于多色成像/拆分也愈發(fā)成熟，利用不同熒光染料的發(fā)射光譜的不同來進(jìn)行多通道拆分能夠滿足大多數(shù)情況下的需求，但是由于存在一些發(fā)射光譜大幅重疊的熒光標(biāo)記組合和一些自發(fā)熒光信號的存在，有時候利用熒光強度還是不能夠很好的拆分多熒光標(biāo)記。此時除了利用智能分析軟件來進(jìn)行基于熒光強度拆分的方法之外，還可以利用熒光壽命來進(jìn)行成像。熒光壽命是熒光物質(zhì)的固有屬性，與染料濃度、激發(fā)光強度等因素?zé)o關(guān)，取決于染料內(nèi)在性質(zhì)以及所處的微環(huán)境，因此相比于熒光強度成像，熒光壽命成像會更加穩(wěn)定，并能同步獲取更多維度的數(shù)據(jù)信息。
熒光強度圖像（左）與熒光壽命圖像（右），紅色：細(xì)胞膜；青色：葉綠體；黃色：肌動蛋白。
對于長時間活細(xì)胞觀察實驗而言，由于熒光壽命并不會受到熒光漂白所影響，所以更適合一些定量實驗。
用Oregon Green 488-BAPTA標(biāo)記的鈣震蕩動態(tài)
熒光壽命還受到染料所處微環(huán)境的影響，所以往往被用來開發(fā)生物傳感器來檢測一些細(xì)胞微環(huán)境的指標(biāo)，比如pH值等。
利用檢測pH變化來觀察溶酶體成熟過程
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講師介紹
齊瑤
徠卡生命科學(xué)應(yīng)用專員
2015年畢業(yè)于日本神戶大學(xué)醫(yī)學(xué)部，研究方向為分子藥理學(xué)。擁有多年細(xì)胞分子生物學(xué)科研經(jīng)歷，在寬場顯微鏡成像和激光共聚焦顯微鏡的各類應(yīng)用領(lǐng)域積累了豐富經(jīng)驗。2019年加入徠卡，主要負(fù)責(zé)光學(xué)顯微鏡產(chǎn)品的技術(shù)支持。
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