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高速逆流色譜儀的主要原理介紹
閱讀:1928發(fā)布時(shí)間:2022-8-16
高速逆流色譜法 (High-speed Countercurrent Chromatography,簡(jiǎn)稱(chēng)HSCCC),是一種連續(xù)高效的液液分配色譜技術(shù),與其它色譜技術(shù)不同的是它不需任何固態(tài)載體,因此能避免固相載體表面與樣品發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致樣品的污染、失活、變性和不可逆吸附等不良影響。同時(shí)它也具有適用范圍廣、快速、進(jìn)樣量大、費(fèi)用低、回收率高等優(yōu)點(diǎn)。因此,己在生物、醫(yī)藥、食品、材料、化妝品和環(huán)保等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用,尤其是在天然產(chǎn)物活性成分的分離純化領(lǐng)域受重視。
應(yīng)用范圍廣,適應(yīng)性好。由于溶劑系統(tǒng)的組成與配比可以是無(wú)限多的,因而從理論上講HSCCC適用于任何極性范圍的樣品的分離,所以在分離天然化合物方面具有其獨(dú)到之處。并因不需固體載體,而消除了氣液色譜中由于使用載體而帶來(lái)的吸附現(xiàn)象,適用于分離極性物質(zhì)和其它具有生物活性的物質(zhì)。
原理
在對(duì)旋轉(zhuǎn)管的流體動(dòng)力平衡進(jìn)行研究時(shí),偶然發(fā)現(xiàn)了高速逆流色譜法,其為建立于單向性流體動(dòng)力平衡體系之上的一種逆流色譜分離方法。當(dāng)使用緩慢的速度轉(zhuǎn)動(dòng)螺旋管時(shí),螺旋管中的兩相由一端分布到另一端,將其中一相當(dāng)作移動(dòng)相,由一端往另一端洗脫時(shí),在螺旋管里,另一相的保留值約為一半,然而隨著移動(dòng)相流速的增大,這一保留量會(huì)減小,從而降低了分離效率。然而加快螺旋管的轉(zhuǎn)速,會(huì)改變兩相的分布,當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到臨界范圍時(shí),沿螺旋管長(zhǎng)度兩相就會(huì)*分開(kāi),其中首端的一段會(huì)由某一相全部占據(jù),這一段被叫做首端相,尾端的一段由另一段全部占據(jù),這一段被叫做尾端相。兩相的這種單向性分布特征正好為高速逆流色譜所利用。在高的螺旋管轉(zhuǎn)動(dòng)速下,若由首端相往尾相送入,其將穿過(guò)首端相往螺旋管的尾端移動(dòng)。當(dāng)分離時(shí),先將其中的一相(固定相)注入到螺旋管內(nèi),之后將移動(dòng)相由合適的一端泵入,使其載著樣品在螺旋管中無(wú)限次的分配。固定相隨著儀器的轉(zhuǎn)速越快,保留的越多,也就會(huì)有越好的分離效果,并且使分離速度得到大大地提高,所以叫做高速逆流色譜。
應(yīng)用領(lǐng)域:
(1)天然產(chǎn)物已知有效成分的分離純化
(2)化學(xué)合成物質(zhì)的分離純化
(3)中藥指紋圖譜和質(zhì)量控制研究
(4)抗生素的分離純化
(5)天然產(chǎn)物未知有效成分的分離純化(新化合物開(kāi)發(fā))
(6)海洋生物活性成分的分離純化
(7)放射性同位素分離
(8)多肽和蛋白質(zhì)等生物大分子分離以及手性分離等。
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