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特異性的挑選首要需求考慮四個方面:蛋白特異性、種屬特異性、試驗辦法特異性、符號物的特異性。
1.蛋白特異性:
針對需求檢測的蛋白查找抗體,幾個細節(jié)要區(qū)分,重組表達的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測,對抗體的要求是不一樣的,留意查看抗體說明書的檢測說明。如果重組蛋白不是全長表達,則需求留意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。
2.種屬特異性:
同種蛋白不同物種,有著或大或小的差異?,F(xiàn)在大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或規(guī)劃多肽抗原的,根據(jù)蛋白的同源性的狀況與其他種屬發(fā)生交叉反響。需求參照說明書注明的可反響種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體,能夠經(jīng)過蛋白的序列比對,挑選同源序列免疫的抗體,不過一般這種狀況生產(chǎn)商不會受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴,如果能夠申請到免費的抗體樣品,則利于抗體挑選。
3.試驗辦法特異性:
現(xiàn)在運用抗體的試驗辦法有許多,不同的運用辦法過程中,因為對蛋白樣品的處理辦法不一樣,蛋白的含量有差異,對抗體的辨認表位和效價要求都是不一樣的。詳細的根據(jù)說明書注明的產(chǎn)品應(yīng)用辦法進行挑選。
4.符號物的特異性:
一般基于試驗操作的試驗辦法不會運用帶有符號的一抗,比方 WB、IHC 等,都是經(jīng)過二抗類的試劑符號達到結(jié)果呈現(xiàn)的目的??墒腔趦x器剖析的一些試驗,或許就會運用到直接符號的一抗,比方流式試驗。那么需求了解到自己將要運用的儀器能檢測到的熒光范圍,針對不通的參數(shù)要求挑選對應(yīng)的符號物。在免疫熒光雙標試驗中,需求選配不同的熒光符號物。
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