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如何用正確的洗板方法解決ELISA檢測結(jié)果漂移的問題
2024-9-18 閱讀(199)
正確的洗板操作對于降低ELISA實驗中的變異和消除背景干擾至關(guān)重要。如果您正在使用自動化洗板設(shè)備或?qū)嶒灲Y(jié)果的變異程度高于預(yù)期，希望以下文章和視頻能幫助您優(yōu)化實驗流程，確保實驗結(jié)果回歸正常。
手動洗板的優(yōu)點
雖然ELISA洗板的目的是去除未結(jié)合的反應(yīng)物，但過度洗板會不同程度上導(dǎo)致抗體與目標蛋白解離，從而導(dǎo)致吸光值偏低和%CV值偏高。此外，殘留液體去除不完全（通常發(fā)生在自動洗板設(shè)備中）也會導(dǎo)致更高的檢測背景，這些對HCP ELISAs檢測尤為不利，因為其本身就具有較高的基線吸光值。
因此，Cygnus專家建議在使用Cygnus ELISA試劑盒時盡量采用手動洗板的方法。該方法簡便易學(xué)，無需任何特殊設(shè)備。只要準備一些低纖維吸水紙和一個洗瓶就可輕松操作，需要注意的是洗瓶的出水口要修剪成大開口斜面以確保洗液的充分流動與合適的沖洗力度。
修剪洗瓶出水口
準備工作：稀釋洗滌液并準備好洗板操作區(qū)域
用蒸餾水將20×的濃縮洗滌液稀釋至1×洗滌液裝入洗瓶內(nèi)，將吸水紙鋪開放在水槽旁邊干凈的工作臺上。
注：請勿使用除ELISA試劑盒提供之外的其他洗滌液，這樣可能會影響實驗結(jié)果。
第一步：倒出ELISA孔板內(nèi)的液體
用拇指按住ELISA板一側(cè)的中間位置，用食指按住另一側(cè)，從底部托起ELISA板?？梢杂媚粗负褪持缚圩】装鍡l或板條兩端的標簽，以避免板條從板托中掉出。在水槽上方迅速翻轉(zhuǎn)孔板，借助手臂的力量快速向下移動并突然停止，動作要連貫，讓液體借助慣性從孔板內(nèi)甩入水槽。在操作正確的情況下，手指、孔板條和板托外側(cè)不應(yīng)沾上任何液體。然后重復(fù)這個傾倒動作一次。
注：如果擔(dān)心孔板條從板托中掉出，可以在每個孔板條上提前標注好位置。
第二步：用吸水紙吸干殘留液體，然后輕輕拍板
立即將倒扣的孔板按壓在吸水紙上，并將孔板移至吸水紙未使用的區(qū)域，輕輕拍板三次，每一次拍板都要在吸水紙未使用的區(qū)域。不要用力拍板，如果拍板力度過大會在板上傳遞不均勻的沖擊能量，致使抗體/分析物復(fù)合物的解離。
第三步：清洗孔板
用裝有1×洗滌液的洗瓶，從板的上邊一側(cè)開始，將洗滌液逐個填滿所有孔到溢出，直至最后一個孔，然后再按照步驟1和2的方法丟棄洗滌液并輕輕拍板。
注：不用擔(dān)心洗滌液從孔內(nèi)溢出，但要避免洗滌液在孔內(nèi)長時間浸泡。
重復(fù)上述步驟3次，總共進行4次洗板操作。需要注意的是，在第2次和第4次洗板時，要從板的下邊一側(cè)反方向逐孔加入洗滌液。這樣操作可以確保所有孔的洗滌液總浸泡時間基本相同。另外，無需額外增加洗板次數(shù)，這樣可能會使結(jié)合在抗體上的分析物解離，導(dǎo)致檢測靈敏度降低。
最后一次洗板后，還是按照步驟1和2所述的方法吸干/輕拍吸水紙。然后將ELISA板倒扣在吸水紙上靜置約20秒，以便徹底排干殘留液體，最后再在吸水紙上拍板4次。
注：每次拍板后，孔板最好能在手中水平旋轉(zhuǎn)180度，這樣可以確保板兩端的受力更加均勻。
第四步：擦干多余液體
用干凈的吸水紙擦拭孔板的底部外部，清除殘留的洗滌液。最后將洗好的ELISA板放回到實驗操作臺并加入底物。
注：不要讓孔板徹底晾干，否則酶的活性將會受到影響。底物要遠離水槽，因為洗板過程可能會產(chǎn)生氣溶膠，導(dǎo)致孔板或者底物被污染，影響檢測結(jié)果。
Cygnus Technologies, LLC.為生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)提供產(chǎn)品和分析方法，旨在加速研發(fā)階段和提高產(chǎn)品質(zhì)量。Cygnus開發(fā)和生產(chǎn)的生物工藝殘留試劑盒，用于檢測超過50種不同表達系統(tǒng)的特異性雜質(zhì)。Cygnus作為專注于生物技術(shù)應(yīng)用免疫檢測的高靈敏度分析技術(shù)的專家，Cygnus的產(chǎn)品和服務(wù)已經(jīng)被幾乎所有主要的生物制藥公司使用超過25年。
北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理，與國內(nèi)眾多藥企，CRO/CMO企業(yè)建立了長久穩(wěn)定的合作關(guān)系。多年來西美杰的產(chǎn)品及服務(wù)幫助許多企業(yè)加速R&D階段，提高藥物質(zhì)量、純度和安全，加速優(yōu)化研發(fā)工藝，減少產(chǎn)品上市時間，降低QC成本。
