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北京西美杰科技有限公司
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西美杰代理KPL熒光標(biāo)記二抗
一般來(lái)講，偶聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團(tuán)（FITC, RRX, TR, PE, Rhodamine）和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)，對(duì)于Western Blot和ELISA，常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)）中通常使用熒光標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào)，可以使Biotin/Avidin檢測(cè)系統(tǒng)。其中熒光素是具有光致熒光特性的染料，熒光染料種類很多，目前常用于熒光標(biāo)記二抗的主要有以下幾種：
異硫氰酸熒光素-Fluorescein Isothiocyanate (FITC)
FITC純品為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。FITC分子量為389.4，最大吸收光波長(zhǎng)為490～495nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應(yīng)用廣泛的熒光素。由于FITC是小分子化合物，每一個(gè)抗體可標(biāo)記幾個(gè)FITC分子，IgM通常用小分子的熒光素標(biāo)記，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。FITC熒光二抗主要優(yōu)點(diǎn)是人眼對(duì)黃綠色較為敏感，通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。然而FITC的缺點(diǎn)是淬滅快，因此要和抗淬滅劑一起使用。
四甲基異硫氰酸羅丹明-Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate(TRITC)，Rhodamine Red-X(RRX), Texas Red(TR)
這些羅丹明的衍生物耦聯(lián)基團(tuán)具有不同的吸收波長(zhǎng) (550, 570, 596nm)和最大發(fā)射波長(zhǎng)（570, 590, 620nm）。在使用裝有氪氬燈的激光共聚焦掃描顯微鏡作三標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)時(shí)，RRX尤其有用，可以和Cy2(或者FITC)和Cy5一起使用，因?yàn)镽RX的發(fā)射波長(zhǎng)在Cy2和Cy5中間，而且和這兩者覆蓋都很少，氪氬燈激發(fā)光為488nm，598nm和647nm，分別是Cy2(FITC), RRX和Cy5的理想激發(fā)波長(zhǎng)。因?yàn)镕ITC和PE可以被氬燈的488nm波長(zhǎng)激發(fā), 在流式細(xì)胞儀中用FITC作雙標(biāo)，另一種用藻紅蛋白（PE）耦聯(lián)基團(tuán)要比羅丹明好。TRITC為羅丹明的衍生物，呈紫紅色粉末，較穩(wěn)定，最大吸收光波長(zhǎng)為 550nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為620nm，呈現(xiàn)橙紅色熒光，與FITC的綠色熒光對(duì)比鮮明，可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧?。因TRITC熒光淬滅慢，也可用于單獨(dú)標(biāo)記染色。
菁類染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)
Cy2耦聯(lián)基團(tuán)激發(fā)波長(zhǎng)為492nm，發(fā)光波長(zhǎng)為510nm的綠色可見光。Cy2和FITC使用相同的濾波片。由于Cy2比FITC在光下更穩(wěn)定，要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片劑，因?yàn)檫@種抗淬滅劑和Cy2反應(yīng)，在染色片儲(chǔ)存后會(huì)導(dǎo)致熒光微弱和擴(kuò)散。Cy3和Cy5比其他的熒光團(tuán)探針要更亮，更穩(wěn)定，背景更弱。Cy3耦聯(lián)基團(tuán)激發(fā)光和發(fā)射光波長(zhǎng)很接近TRITC, 在熒光顯微鏡中，可使用和TRITC一樣的濾波片。Cy3在氬光燈（514nm或528nm）下可以被激發(fā)出50％的光強(qiáng)，在氦氖燈（543nm）或者汞燈（546nm）下則約75％。Cy3可以和熒光素一起作雙標(biāo)。Cy3還可以和Cy5一起在共聚焦顯微鏡實(shí)驗(yàn)中作多標(biāo)記。Cy5耦聯(lián)基團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)最大650nm，發(fā)光波長(zhǎng)最大670nm。在氪氬燈（647nm）下它們可被激發(fā)出98％的熒光，在氦氖燈下（633nm）為63％。Cy5可以和很多其他的熒光基團(tuán)一起用在多標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)中。由于它的最大發(fā)射波長(zhǎng)在670nm，Cy5很難用裸眼觀察，而且不能用汞燈作理想的激發(fā)。通常觀察Cy5時(shí)采用具有合適激發(fā)光和遠(yuǎn)紅外檢測(cè)器的共聚焦顯微鏡，在水相封片劑中應(yīng)當(dāng)加入抗淬滅劑。使用傳統(tǒng)的表面熒光顯微鏡時(shí)，不推薦使用Cy5。
注：由于觀察熒光需要一定波長(zhǎng)的激發(fā)光，必須根據(jù)實(shí)驗(yàn)室已有的儀器可發(fā)光的波段進(jìn)行選擇。另外注意多標(biāo)記中對(duì)探針色彩區(qū)分程度的要求，例如，若丹明紅-X (RRX)和德克薩斯紅(TR)熒光素的區(qū)別就比四甲基若丹明（TRITC）或者Cy3的區(qū)別明顯。如果對(duì)靈敏度有更高的要求，則Cy3和Cy5就比其他的熒光團(tuán)探針要亮。
西美杰代理KPL熒光標(biāo)記二抗
西美杰代理的全球二抗和底物生產(chǎn)廠商LGC·Seracare·KPL提供豐富的熒光標(biāo)記二抗，可檢測(cè)抗人、大鼠、小鼠、豬、驢、綿羊、山羊、小雞、馬、兔、倉(cāng)鼠、狗、牛，以及多種細(xì)菌類等物種；另外，還有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同類型抗體。小編下面匯總了部分常用熒光二抗：
FITC | TRITC | Cy3 | Cy5 | |
抗人 | 5230-0288 | 5230-0288 | - | 5230-0370 |
抗小鼠 | 5230-0427 | 5230-0336 | 5230-0364 | 5230-0376 |
抗兔 | 5230-0298 | 5230-0332 | 5230-0359 | 5230-0372 |
抗山羊 | 5230-0294 | - | 5230-0358 | 5230-0371 |
抗綿羊 | 5230-0324 | - | - | - |
抗雞 | 5230-0325 | - | - | 5230-0379 |
抗鴨 | 5230-0326 | - | - | - |
抗狗 | 5230-0314 | - | - | - |
抗貓 | 5230-0317 | - | - | - |
鏈霉親和素 | 5270-0028 | - | 5270-0022 | - |
注：表格數(shù)字部分為產(chǎn)品貨號(hào)
北京西美杰是LGC·Seracare·KPL授權(quán)的中國(guó)區(qū)代理，為各大科研院所，研究機(jī)構(gòu)、企業(yè)等客戶提供高品質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)，也收到廣大客戶的好評(píng)。北京西美杰是LGC·Seracare·KPL代理，LGC·Seracare·KPL中國(guó)代理，LGC·Seracare·KPL北京代理，LGC·Seracare·KPL總代理，LGC·Seracare·KPL上海代理，LGC·Seracare·KPL全國(guó)代理，LGC·Seracare·KPL西北代理，LGC·Seracare·KPL西南代理，LGC·Seracare·KPL東北代理，LGC·Seracare·KPL華北代理，LGC·Seracare·KPL華南代理，LGC·Seracare·KPL華中代理。
