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        1. 上海易佰聚經(jīng)貿(mào)有限公司
          中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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          離心法質(zhì)粒大量提取試劑盒

          時(shí)間:2013-1-5閱讀:1055
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           英文名稱:Plasmid Maxiprep Kit   

          中文名稱 :離心法質(zhì)粒大量提取試劑盒
          編號(hào):PD1511-01
          規(guī)格: 10次
          品牌:biomiga
           
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          說(shuō)明 :

           
          試劑盒組分:
           
          Catalog#
          PD1511-00
          PD1511-01
          PD1511-02
          Preps
          2
          10
          25
          ezBindTM Columns
          2
          10
          25
          Buffer A1
          22 mL
          110 mL
          270 mL
          Buffer B1
          22 mL
          110 mL
          270 mL
          Buffer C1
          27 mL
          135 mL
          330 mL
          RNase A
          (20 mg/mL)
          2.2 mg
          (110 µL)
          11 mg
          (550 µL)
          27 mg
          (1.35 µL)
          Elution Buffer
          6 mL
          30 mL
          60 mL
          User Manual
          1
          1
          1
           
          保存條件:
           
          RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
           
          注意事項(xiàng):
          1. 質(zhì)??截悢?shù):純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí),使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer。.
          2. 轉(zhuǎn)化菌:若為-70oC甘油凍存的菌,請(qǐng)先涂布平板培養(yǎng)后,再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
          3. 柱結(jié)合能力:1 mg
          操作簡(jiǎn)明步驟:
          1. 取100 µL新鮮的菌液接種到150-200 mL (勿超過(guò) 200 mL)的LB培養(yǎng)基(含適量抗生素),37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
          2. 加入10 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。
          3. 加入 10 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。 
          4. 加入12 mL Buffer C1, 立即反轉(zhuǎn)5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
          5. 將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī),在室溫下14,000 x g 離心10分鐘(若上清中有白色沉淀,可再次離心,)。
          6. 小心吸取離心后的上清液至15 mL管中(避免吸起沉淀),加入12 mL 100% 乙醇,立即搖勻,需馬上離心過(guò)DNA柱。
          7. 立即轉(zhuǎn)移20 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中,室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步直至所有的溶液通過(guò)DNA柱。
          8. 向離心柱中加入10 mL 70% 乙醇,室溫下>2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“9”。
          9. 將離心柱放回高速離心機(jī)中,室溫下>2,500 x g 開蓋離心10分鐘,以*去除殘留的乙醇。
          10. 將離心柱轉(zhuǎn)至一個(gè)新的50 mL離心管中,向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL滅菌ddH2O(pH在7.0-8.5之間)或Elution Buffer,室溫放置1分鐘,5,000 x g離心5分鐘,以洗脫質(zhì)粒DNA。若想提高得率,將50 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間,5,000 x g離心5分鐘以洗脫質(zhì)粒DNA。
          操作流程:
                    
                   

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