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          biomiga 快速過濾法質(zhì)粒超大量提取試劑盒

          時(shí)間:2013-1-5閱讀:1262
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          英文名稱:Plasmid ezFilter Megaprep 6 Kit   

          中文名稱 :快速過濾法質(zhì)粒超大量提取試劑盒

          編號:PD1612-01

          規(guī)格: 2次

          品牌:biomiga

          說明 :

          試劑盒組分:
           
          Catalog#
          PD1612-01
          Preps
          2
          DNA Unit
          2
          Filter Unit
          2
          Replacement Cup
          4
          Buffer A1
          130 mL
          Buffer B1
          130 mL
          Buffer C1
          160 mL
          Buffer KB
          110 mL
          RNase A (20 mg/mL)
          13 mg(650 µL)
          Elution Buffer
          60 mL
          User Manual
          1
           
          保存條件:
           
          RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
           
          注意事項(xiàng):
          1. 質(zhì)??截悢?shù):純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí),使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
          2. 轉(zhuǎn)化菌:若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養(yǎng)后,再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
          3. 柱結(jié)合能力:6 mg
          操作簡明步驟:
          1. 取500 µL新鮮的菌液接種到 800-1000 mL (勿超過 1,000 mL)的LB培養(yǎng)基(含適量抗生素),37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
          2. 加入60 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。
          3. 加入 60 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。 
          4. 加入 72 mL Buffer C1,立即反轉(zhuǎn)幾次至出現(xiàn)絮狀白色沉淀。渦漩震蕩10 秒。充分混勻后,溶液將會變得顏色均一,如果此時(shí)溶液顏色不均一,均局部顏色過深,建議將溶液輕甩幾次,以充分混合溶液,室溫下靜置10分鐘。
          5. 將雙層Filter unit與500 mL或1000 mL的滅菌瓶(Corning# 430518 or 430282 or equivalent) 連接,旋緊,再將此裝置與真空負(fù)壓裝置連接。
          6. 先將步驟“5”中底部較澄清的裂解產(chǎn)物用50 mL移液管轉(zhuǎn)移至雙層Filter unit中,靜置5分鐘后打開真空裝置,使負(fù)壓由低到高,5分鐘后增至zui大(0.04 Mpa)。
          7. 當(dāng)大部分裂解液已被過濾時(shí),關(guān)掉真空負(fù)壓裝置,等候1分種,拆卸裝置,移去雙層Filter unit。
          8. 再將DNA unit杯與一個(gè)新的滅菌的500ml或1000ml螺口標(biāo)準(zhǔn)瓶連接,旋緊。并將過濾嘴與真空負(fù)壓裝置連接。將步驟“7”中收集到的裂解液中加入72 mL 100%乙醇,立即混合均勻,立即將一半倒入DNA unit杯中,開啟負(fù)壓裝置,進(jìn)行過濾吸附操作。
          9. 再將剩下一半倒入DNA unit杯中,當(dāng)所有裂解液已過濾完,再維持真空1分鐘后,關(guān)掉負(fù)壓裝置。
          10. 在DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB,開啟負(fù)壓裝置至zui大(0.04Mpa)并維持1分鐘,使Buffer KB*通過DNA Unit杯。
          11. 在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇,開啟負(fù)壓裝置至zui大(0.04Mpa)并維持1分鐘,使乙醇*通過DNA Unit杯。重復(fù)此操作步驟一次。
          12. 在DNA Unit杯中加入60 mL100%乙醇,開啟zui大負(fù)壓維持1分鐘,關(guān)掉負(fù)壓裝置,倒掉瓶子中的廢液,將DNA Unit杯重新連接至標(biāo)準(zhǔn)瓶上,開啟負(fù)壓裝置至zui大負(fù)壓,真空抽20分鐘,以充分去除殘留的乙醇。
          13. 關(guān)掉負(fù)壓裝置,靜置一分鐘,移去標(biāo)準(zhǔn)瓶,將DNA Unit 連接至一個(gè)新的50 mL的離心管中,并旋緊。
          14. 加入10 mL 滅菌 ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上,室溫放置2分鐘,打開負(fù)壓裝置至zui大(0.04 Mpa)洗脫DNA。此時(shí)會收集到3~5 mL洗脫液,這是1st 洗脫液。
          15. 關(guān)掉負(fù)壓裝置,將DNA Unit連接至一個(gè)新的50mL的離心管中,加入8 mL 滅菌 ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上,室溫靜置2分鐘,開啟負(fù)壓裝置至zui大(0.04 Mpa)洗脫DNA。此時(shí)會收集到約5-6 mL洗脫液,這是2nd洗脫液。

          操作流程:

                   

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