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水產(chǎn)品中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定--液相色譜法
1.范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定方法──液相色譜法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品可食部分中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定。
2.規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的版本。凡是不注日期的引用文件，其版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB/T 6682-1992 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
3. 原理
樣品中呋喃唑酮用二氯甲烷提取，蒸發(fā)濃縮提取液，無水硫酸鈉去除水分，用正己烷液-液萃取除去脂肪及其它雜質(zhì)，離心，取下層清液經(jīng)膜過濾器后用液相色譜儀分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。
4. 試劑和材料
4.1 乙腈：色譜純。
4.2 二氯甲烷：色譜純。
4.3 正己烷：分析純，用乙腈飽和。
4.4 85%磷酸：分析純。
4.5 乙腈水溶液：乙腈+水（體積分?jǐn)?shù)為80+20）。
4.6 無水硫酸鈉：分析純；經(jīng)640℃灼燒4.0h后，貯于密閉容器中備用。
4.7 無水硫酸鈉柱：200mm×24mm（id），內(nèi)裝50mm~100mm高的無水硫酸鈉。
4.8 呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99.5%。
4.9 呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取10.0mg呋喃唑酮，用乙腈水溶液溶解并稀釋定容至50mL棕色容量瓶中，在冰箱中冷藏保存，保存期一個(gè)月。該液1mL相當(dāng)于200μg呋喃唑酮。
4.10 試驗(yàn)用水：符合GB/T 6682一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。
5.1 液相色譜儀，配有紫外檢測(cè)器。
5.2 高速組織搗碎機(jī)。
5.3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
5.3 離心機(jī)。
5.4 振蕩器。
5.5 蒸發(fā)燒瓶，具塞。
5.6 刻度離心管。
5.7 膜孔濾器：0.45μm。
6.1 色譜柱：C18柱, 250mm×4.6mm（id），粒度5μm。
6.2 流動(dòng)相：乙腈+水+磷酸（體積分?jǐn)?shù)為40+60+0.1）。
6.3 流速：0.8mL/min。
6.4 檢測(cè)波長(zhǎng)：365nm。
6.5 柱溫：室溫。
6.6 進(jìn)樣量：20μL。
7. 樣品測(cè)定
7.1 試樣制備
取魚、蝦、蟹、鱉等水產(chǎn)品可食部分，切成不大于5mm×5mm×5mm的小塊后混勻，經(jīng)高速組織搗碎機(jī)搗碎即可，充分混勻。
7.2 提取
稱取搗碎樣品約10g（至0.01g），加25mL二氯甲烷攪拌分散后浸泡15min，在振蕩器上振蕩5min，提取液經(jīng)無水硫酸鈉柱濾入蒸發(fā)燒瓶中，殘?jiān)謩e用25mL和15mL二氯甲烷按上述方法各重復(fù)提取一次，再用15mL二氯甲烷沖洗無水硫酸鈉柱，并采用洗耳球吹出柱中液體，濾液均濾入同一蒸發(fā)燒瓶中，濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在45℃左右水浴下減壓蒸發(fā)去除溶劑，蒸發(fā)速度控制在每秒一滴。
7.3 凈化
用1.0mL流動(dòng)相和1.0mL正己烷溶解殘?jiān)⒊浞窒礈煺舭l(fā)燒瓶，將液體移入離心管中，在4000r/min離心5min，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，再向離心管中加入1.0mL正己烷，混勻2min，離心，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，下層清液經(jīng)0.45μm膜孔濾器過濾后進(jìn)HPLC分析。
7.4 測(cè)定
7.4.1 呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作液配制
臨用前，取呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋成濃度為0.01μg/mL~1.00μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
7.4.2 液相色譜測(cè)定
根據(jù)樣品液中呋喃唑酮?dú)埩袅壳闆r，選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液中呋喃唑酮響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液等體積參插進(jìn)樣進(jìn)行測(cè)定。在上述色譜條件下，呋喃唑酮保留時(shí)間約為5.8min。
7.5 空白試驗(yàn)
除不加試樣外，按7.2~7.4步驟進(jìn)行。
8. 結(jié)果計(jì)算與表述
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品液的峰高，按式（1）計(jì)算樣品中呋喃唑酮?dú)埩袅浚?font face="Times New Roman"> （h-h0）×V×1000
C=Cs × ···································（1）
hs×m
式中：
C──樣品中呋喃唑酮?dú)埩袅?，單位為微克每千克?font face="Times New Roman">μg/kg）；
h──樣品液中呋喃唑酮的峰高；
hs──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中呋喃唑酮的峰高；
h0──空白試驗(yàn)的峰高；
Cs──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中呋喃唑酮的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
V──樣品液zui終定容體積，單位為毫升（mL）；
m──樣品的稱取量，單位為克（g）。
9. 線性范圍、檢測(cè)限、回收率
9.1 線性范圍
本方法的呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作液線性范圍為0.01μg/mL ~1.00μg/mL。
9.2 檢測(cè)限
本方法的檢測(cè)限為1μg/kg。
9.3 回收率
本方法回收率為72.8%~96.2%。