高靈敏度的ELISA（HS-ELISA）或酶聯(lián)免疫熒光測量法（ELFIA）

    Shalev等用堿性磷酸酶（AP）標記的抗體作用于具有潛在熒光的底物4-甲基傘形酮磷酸鹽，反應(yīng)后生成高強度的熒光物質(zhì)——4-甲基傘形酮，可用熒光儀測量。

    與AP的傳統(tǒng)顯色底物（P-NP）比較，新底物使ELISA的檢測極限提高了16～39倍，zui小檢出值可達10^-15mol／L，即渺克（ag=10^-18g）水平。除AP外，目前用于熒光測定的標記酶還有β，半乳糖苷酶（β-G）和HRP。三種酶及其相應(yīng)底物和應(yīng)用效果見表。

    ELISA應(yīng)用的酶和熒光底物表

    酶     底 物     產(chǎn) 物    激發(fā)光（nm）     發(fā)射光（nm）      相應(yīng)的信號

    AP      MUP       MU         360            450              10

   β-G     MUG       MU         360            450              10

    HRP     HPA     二聚體       317            414             0.03

    注：MUP（4-甲基傘形酮磷酸鹽）MU（4-Ep基傘形酮）  MUG（4-1~基傘形酮…p…D—半乳糖苷）四A（羥基丙酸）

    Kitamura等將ELFIA法進一步改進，用于定量測定人IL-2，采用雙抗體夾心法，并結(jié)合使用生物素化抗體和p—半乳糖苷酶標記鏈霉親合素，以MUG為底物，敏感性比常規(guī)ELISA法提高約100倍，可測出IL-2的zui低水平為0．3pR／mL。

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