一、陰離子交換色譜柱

1.操作壓力

離子交換色譜柱的操作壓力不能超過，色譜柱說明書中有規(guī)定的大壓力，否則會(huì)造成色譜不可逆損失。

2.色譜柱的啟動(dòng)

采用標(biāo)準(zhǔn)淋洗液（一般指等淋洗條件）使淋洗達(dá)到平衡后，進(jìn)行色譜標(biāo)準(zhǔn)陰離子的測(cè)試分離度和重現(xiàn)性。

3.色譜柱的貯放

一般情況下，可以采用標(biāo)準(zhǔn)淋洗液作為貯放液，長(zhǎng)期貯放需要將色譜柱兩端密封。但對(duì)于非抑制型離子色譜柱或早期的抑制型離子色譜柱，由于所用淋洗液比較接近中性，用淋洗液貯放易于長(zhǎng)霉，因此需要用高pH的溶液（如0.1 M NaOH）作貯放液，或者的淋洗液中加入防霉劑（如疊代氮）作貯備液。

4.色譜柱的清洗

對(duì)于陰離子色譜，通用有三種清洗方式，分別用于清洗酸溶性、堿溶性或有機(jī)污染物，在清洗過程中必須要確保嚴(yán)格按照清洗過程進(jìn)行，否則會(huì)引起色譜柱的局部高壓而損壞色譜柱。對(duì)于有機(jī)溶劑清洗色譜柱，需要逐步減少有機(jī)溶劑的量以避免由于混和而造成的流動(dòng)相粘度的變化。

(1)選擇合適的清洗溶劑

a.      對(duì)低價(jià)親水污染物：用10倍的淋洗液；

b.      對(duì)高價(jià)親水污染物：用1到3M的鹽酸作淋洗液；

c.      對(duì)金屬污染物：會(huì)引起色譜峰不對(duì)稱性，如鐵離子會(huì)引起硫酸根和磷酸根的拖尾，鋁會(huì)引起磷酸根回收率降低，可采用絡(luò)合劑酸類，如0.2M 草酸;

d.      有機(jī)污染物：有機(jī)污染物會(huì)引起色譜柱效降低，可以采用兼容的有機(jī)溶劑清洗，有時(shí)也可以采用高濃度的鹽酸與有機(jī)溶劑混合清洗則更為有效，如200mM鹽酸和80%乙腈，但要注意這種溶液要混合立即使用，長(zhǎng)時(shí)間混合會(huì)造成酸的分解并且損壞色譜柱。要特別注意色譜柱有機(jī)兼容性，如果該色譜柱只能對(duì)15%的有機(jī)溶劑兼容，這時(shí)有機(jī)溶劑濃度就不能超過15%。

(2)清洗過程

a.      配制500mL合適的清洗溶液；

b.      斷開抑制器中，分別清洗保護(hù)柱和分離柱，如果分離柱和保護(hù)柱串聯(lián)清洗，則將保護(hù)柱接在分離柱之后；

c.      設(shè)置流速對(duì)2mm色譜柱采用0.5mL/min,而對(duì)4mm色譜柱采用1mL/min；

d.      用二次去離子水沖洗色譜柱15分鐘；

e.      用清洗液清洗色譜柱60分鐘；

f.       用二次去離子水沖洗色譜柱15分鐘；

g.       連接抑制器，用淋洗液平衡色譜柱。.

二、陽離子交換色譜柱

陽離子色譜柱的操作壓力，啟動(dòng)和貯放基本與陰離子色譜柱相似，一般陽離子色譜貯放液均采用淋洗液，但于羧酸型陽離子色譜柱，為了避免色譜固定相產(chǎn)生酯不能采用醇類作為流動(dòng)相成分，一般也不用堿作為流動(dòng)相成分，特別是硅膠型基質(zhì)的固定相。

1．色譜柱的清洗

對(duì)于色譜柱的清洗，主要分兩種情況

(1)高價(jià)陽離子和酸溶性組分的清洗

a.       配制1M HCl清洗液（注意不能用硝酸代替鹽酸，硝酸不能有效去除鐵離子，也不以用醇或堿溶液）;

b.       斷開抑制器，如果系統(tǒng)含有保護(hù)柱和分離柱，將保護(hù)柱接在分離柱之后;

c.       設(shè)置泵的流速對(duì)4mm色譜柱為1.0 mL/min，對(duì)2mm色譜柱為0.5mL/min;

d.       用10 mM HCl沖洗色譜柱15分鐘;

e.       用清洗液（1 M HCl）通色譜柱60分鐘;

f.       用10 mM HCl沖洗色譜柱;

g.       用淋洗液平衡色譜柱30分鐘;

h.       重新連接抑制器到色譜柱和保護(hù)柱;

(2)親脂性陽離子和有機(jī)污染物

a.       斷開抑制器，將色譜柱直接與泵相連;

b.       設(shè)置泵的流速對(duì)4mm色譜柱為1.0 mL/min，對(duì)2mm色譜柱為0.5mL/min;

c.       如果對(duì)梯度泵分別設(shè)置100 mM HCl和90%乙腈，用梯度清洗色譜柱，如果沒有梯度泵則分別用這兩種清洗液清洗色譜柱;

d.       重新連接色譜柱，用淋洗液重新平衡色譜柱。

三、離子排斥色譜柱

1.色譜柱保護(hù)

色譜柱的操作壓力，一般情況下離子排斥色譜柱的操作壓力不是很高，因此要注意色譜柱的大壓力和大流速，以免造成色譜柱不可逆損失。

色譜柱的啟動(dòng)，對(duì)于新的色譜柱或者色譜柱長(zhǎng)期不用，用淋洗液沖洗20分鐘，清除色譜固定相中的聚合物，以保護(hù)抑制器不被損壞。按測(cè)試色譜條件測(cè)試離子排斥色譜柱的分離度和重現(xiàn)性。

2.色譜柱的貯放

對(duì)于長(zhǎng)期貯放離子排斥色譜柱，需要用貯備液沖洗色譜柱10分鐘，擰緊色譜柱兩封口中。

3.色譜柱的清洗

(1)色譜柱的清洗溶液

a.      鐵離子污染會(huì)降低色譜峰高，可以用2至5 mM的檸檬酸清洗，如果仍有污染，可以用其它絡(luò)合物酸如草酸來清洗；

b.      有機(jī)污染物：可以用5%有機(jī)溶劑的清洗，高不超過15%的有機(jī)溶劑，同時(shí)也可在有機(jī)溶劑中加入5至10 mM HCl，通用的清洗溶液為在10%乙腈中含5 mM七氟丁酸。

(2)色譜柱的清洗過程

a.      配制500mL清洗溶液;

b.      將抑制器與分離柱斷開;

c.      設(shè)置泵的流速為0.5 mL/min;

d.      清洗溶液清洗色譜柱60分鐘;

e.      如果進(jìn)行梯度泵清洗，可以在30分鐘后達(dá)到高的有機(jī)溶劑濃度，清洗30分鐘后，逐步減少有機(jī)溶劑的濃度;

f.       重新連接抑制器;

g.      用常規(guī)淋洗液平衡色譜柱進(jìn)行正常操作。

四、離子對(duì)色譜柱

1.色譜柱的保護(hù)

色譜柱操作壓力不能超過大壓力，需要控制壓力和流速。

開始使用前，用淋洗液沖洗平衡色譜柱，用標(biāo)準(zhǔn)溶液檢查色譜的分離度和重現(xiàn)性。

2.色譜柱的貯放

對(duì)于長(zhǎng)期貯放離子排斥色譜柱，需要用貯備液沖洗色譜柱10分鐘，擰緊色譜柱兩封口中。

3.色譜柱的清洗

(1)色譜柱的清洗溶液

a.      高濃度的氫氧化物溶液如10倍的淋洗液用于去除低價(jià)親水性污染物;

b.      用1至3 M HCl去除高價(jià)親水性離子;

c.      金屬污染物會(huì)影響色譜峰形/改變被測(cè)物的回收率。如鐵的污染會(huì)導(dǎo)致多聚磷酸鹽的峰高減少，然而通過連接注射多聚磷酸樣品，可以去除鐵離子，也可以用1至3M HCl去除金屬污染物，如果用酸處理仍不能除去污染物，可以采用螯合劑如0.2 M 草酸來處理;

d.      有機(jī)污染物指非離子化合物或親脂性化合物，可以采用兼容的有機(jī)溶劑去除;

e.      在用有機(jī)溶劑清洗的同時(shí)，也可以加入高濃度的酸如1至3M鹽酸，用酸來抑制電離及污染物與樹脂之間的相互作用。通用的清洗溶液為200mM HCl和80%乙腈，溶液配制后立即使用，因?yàn)橐译嬖谒嵝蚤L(zhǎng)期貯存條件下會(huì)分解。

(2)色譜柱的清洗過程

a.      配制500mL適合的清洗溶液；

b.      斷開抑制器，將保護(hù)柱接在分離柱之后；

c.      設(shè)置泵的流速，對(duì)2mm色譜柱選用0.5 mL/min的流速，4mm的色譜柱選用1mL/min的流速；

d.      在去離子水和80%乙腈沖洗色譜柱15分鐘；

e.      清洗色譜柱60分鐘；

f.       再用去離子水和80%乙腈沖洗色譜柱15分鐘；

g.      重新連接色譜柱和抑制器，平衡后進(jìn)行正常操作。