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聚乙二醇(PEG)沉淀補(bǔ)體消耗試驗(yàn)
閱讀：768 發(fā)布時(shí)間：2012-2-8用低濃度PEG將IC沉淀，沉淀物中加入補(bǔ)體，以溶血反應(yīng)檢測(cè)補(bǔ)體消耗率。
(一)試劑
1．熱聚合人ISC：制備方法同PEG沉淀試驗(yàn)。
2．硼酸緩沖鹽水(朋S) 含硼酸0．1mol/L，硼砂25mmol/L，NaCl 75mmol/L，調(diào)整為pH8.4
3．PEG 用BBS將PEG配成12.5%和2.5%。
4．0.2mol/L EDTA-Na2用1mol/L NaOH調(diào)整為pH7．2。
5．5XVB保存液 NaCl 85，0g，巴比妥5．75g，巴比妥鈉3．75g，加蒸餾水約1 500ral，加熱溶解后補(bǔ)加蒸餾水至2000mL。
6．GVB2+5×VB保存液400mL，0．03mol/LCaCl210mL，0．1mol/L MgCl2 10mL，2％明膠lOOmL，補(bǔ)加蒸餾水至2000mL，pH7．5。
7．致敏綿羊紅細(xì)胞(SRBC) 2％SRBC懸液加等量1：1 000溶血素，37t水浴l0min，用GVB2+將致敏SRBC配成1．5×108/mL。
8．人補(bǔ)體與健康人對(duì)照血清 選用總補(bǔ)體溶血活性正常的健康人血清數(shù)份混合，作為補(bǔ)體來(lái)源。自3名健康人各取血清50mL，各按lmLl份分裝，—70℃凍存，每次取3份血清作為對(duì)照。
(二)操作步驟
1．待測(cè)血清0．3mL，加0．2mol/L EDTA-Na2和BBS各50uL，充分混勻后加入12。5％PEG 0．1mL，混勻，置4℃ 90rain。
2．4℃ 1 700r／rain離心10min，棄上清，沉淀物用2．5％PEG洗1次，用玻璃棒攪拌，再于4℃ 1 700r/min離心15min，棄上清，管口余水用濾紙吸除。
3．加入37℃ 30min預(yù)溫的GV鏟’30uL，待沉淀溶解后，加入混合人補(bǔ)體10uL(用微量加樣器準(zhǔn)確加入)。混勻，置37℃，使補(bǔ)體與IC充分反應(yīng)。
4．加入1．5X108／mL致敏SRBCl．0mL，37℃水浴振蕩60rain。取出后立即加人4℃冷生理鹽水6．5mL，離心，吸取上清液于414mn波長(zhǎng)測(cè)吸光度。
5．每批試驗(yàn)以熱聚合人IgG 5、10、25、50、lOOug/mL制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成相當(dāng)于熱聚合人IgG的ug/mL。