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透射比濁法測定血清C3含量
閱讀：718 發(fā)布時(shí)間：2012-3-31． 原理 血樣本中C3與抗C3血清在液相中反應(yīng)，比例合適時(shí)形成可溶性免疫復(fù)合物。聚乙二醇（PEG6 000）可沉淀其免疫復(fù)合物，使溶液的透光率（T）下降。免疫復(fù)合物的量與C3和抗C3量呈函數(shù)關(guān)系，當(dāng)固定抗C3濃度時(shí)，免疫復(fù)合物的形成量主要取決于樣本中C3的含量，并與其呈正相關(guān)。故通過檢測溶液吸光度值即可判定樣本中C3含量。
2．主要試劑
（1）抗C3血清：有試劑出售，一般按說明書的效價(jià)使用，也可預(yù)先用方陣法滴定其效價(jià)。試驗(yàn)時(shí)按zui適工作濃度稀釋。
（2）稀釋液：PEG 6 1300 dO．00g，NaF 10．00g，NaaHP04·12H20 101．50g，Nail2P04·2H2010．00g，NaN31．0g，加蒸餾水溶解至1 000mL。用C3玻璃濾器過濾，室溫保存。
3．操作步驟 將抗C3血清按所示效價(jià)稀釋，加到聚苯乙烯反應(yīng)板孔中，156~L／孔，然后每孔加入不同稀釋度的待測血清4ul，于微型混合器上振蕩混勻hnin，置37℃水浴30min后，取出混勻，用酶標(biāo)儀測定其490nm吸光度。用抗C3血清溶液160tzL作空白調(diào)零。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得知樣本中C3含量。正常值為1．417±0．2396／L（X±SD）。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：在5個反應(yīng)板微孑L中分別加入稀釋抗C3血清158、156、154、152、150gL，再將C3含量標(biāo)準(zhǔn)品溶解后取2、4、6、8、10／~L分別加至相應(yīng)各孔，zui終體積各為160gul于微型混合器上振蕩lmin，置37℃水浴30min，取出后混勻，用酶標(biāo)儀分別測定490nm吸光度。以C3含量為橫坐標(biāo)、吸光值為縱坐標(biāo)，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
補(bǔ)體其他成分也可用此法測定。