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將RRBC加入正常人血清中，可使B因子活化，激活補體旁路途徑致使BRBC溶解。將正常人新鮮血清加熱使B因子喪失活性（簡稱RB），旁路途徑不能激活，當加入RRBC時不發(fā)生溶血。此時再加入含有B因子的待測血清，旁路途徑即被激活，RRBC發(fā)生溶血反應。根據(jù)溶血程度可測定待測血清中B因子的活性。

1．RRBC懸液制備（見ACH50測定）。

2．RB的制備 取新鮮正常人混合血清（3人以上），56℃水浴加熱15min，滅活其中B因子，新鮮使用或分裝后凍干保存。

3．取一定稀釋度的受檢血清與一定量的RB和1％RRBC懸液混合，置37℃水浴30min，離心，取上清用分光光度計429nm讀取吸光度（A）值，以參考血清A值作為100％進行換算，低于60％者判定為B因子溶血活性降低。