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IL-8的誘生與IL—8的免疫學(xué)檢測(cè)
閱讀：486 發(fā)布時(shí)間：2012-5-12IL-8由單核／巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，其主要生物活性是激活中性粒細(xì)胞。
多用人外周血或臍帶血單個(gè)核細(xì)胞，也可用體外培養(yǎng)傳代細(xì)胞系。LPS、PHA、ConA、IL-i、TNFa均是較理想的刺激劑。
1．常規(guī)分離PBMC，洗滌后，調(diào)整細(xì)胞濃度為5X106／mL。
2．加入終濃度為1ug／mL的LPS及10mg／mL的PI-IA，混勻后置37％，5％C02溫箱中培養(yǎng)48h，離心收集上清。
3．用HCl將培養(yǎng)上清調(diào)為酸性（pI-14．0），經(jīng)SephadexG-75柱分離，收集活性組分即為IL-8粗制品。
免疫學(xué)檢測(cè)法
1．雙抗體夾心法ELISA 同常規(guī)夾心法ELISA。
2．原位免疫細(xì)胞化學(xué)測(cè)定法 該法用于測(cè)定細(xì)胞漿內(nèi)IL-8含量。首先將待測(cè)細(xì)胞（如皮膚成纖維細(xì)胞）培養(yǎng)于平皿中的蓋玻片上，加入適當(dāng)?shù)拇碳ㄈ鏘OOU／mL的hlL-1。），共孵育一定時(shí)間；將載玻片取出，空氣干燥后在丙酮中固定10min；將蓋玻片粘附于載玻片上，加入適當(dāng)濃度的抗IL-8McAb，室溫反應(yīng)30rain，沖洗后加入酶標(biāo)的第二抗體，沖洗后加底物顯色，顯微鏡下觀察。