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IL-4的檢測生物學及免疫學方法
閱讀：1167 發(fā)布時間：2012-5-261、IL-4與LPS共刺激B細胞分泌IgG1和IgE的測定小鼠B淋巴細胞在LPS刺激下首先分泌IgM和IgG3、IgG2b。當IL-4作用于LPS刺激的B細胞時，IgM、ISC3、IgG2b合成產物明顯減少，而IgE、IgCl合成產物顯著地增加。在細胞培養(yǎng)5-6d后，收獲上清，通過對IgE和IgCl測定，間接了解IL-4的含量。IgE測定用放射免疫法；IgCl含量測定可采用雙抗體ELISA夾心法。
2、依賴株CT．4S的增殖試驗 CT．4S細胞是依賴于IL-4，對IL-2低反應的CTLL變異株，其增殖反應（用3H-TdR摻人量來反映）與IL-4呈劑量相關。操作步驟基本同前述用CTLL-2測IL-2，但應設置rIL-2對照，以進一步排除IL-2對結果的影響。
CT．4S細胞是一類粘附細胞，在收獲細胞時，可先用0．25％胰酶消化。CT．4S細胞雖是IL4依賴株，但待測樣品中IL-2含量過高（>100U／mL）或IL4含量過高，均影響IL-4測定。因此在進行大批試驗時，對待測樣品應進行預測，以便將樣品稀釋至該法zui敏感的檢測范圍之內。
3、轉染人IL-4受體的CTLL-2細胞測定人IL-4 由于IL-4的種屬特異性，人、鼠之間沒有交叉反應，故可將人IL-4受體基因轉染到IL-2依賴株CTLL-2細胞系中，使這種細胞同時表達小鼠IL-2受體和人IL-4受體，因此，可常規(guī)維持在含IL-2的培養(yǎng)基中，并可用于檢則重組人IL-4或封閉IL-2活性后的混合樣品中的人IL-4活性。
4、雙抗體夾心ELISA法檢測誘生上清IL-4含量 以免抗IL-4多克隆抗體包被反應板，以酶標抗IL-4McAb進行夾心ELISA法。與標準晶對比，可測出誘生上清中的IL-4含量，操作步驟同常規(guī)ELISA。