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生物通報道：流式細胞分析技術(shù)在現(xiàn)代細胞分子生物學研究中起著越來越重要的作用，這種分析技術(shù)是通過對單個細胞性狀的快速測定，并結(jié)合先進的計算機分析系統(tǒng)，使得在短時間內(nèi)可對大量細胞進行定性、定量測定。但以往進行流式細胞儀操作和分析需要技術(shù)熟練的研究團隊，而且這一設(shè)備價值也不菲——起碼也要10萬美元，有些甚至達到50萬美元，這對于許多實驗室來說并不容易負擔。

近年來一些主流生物技術(shù)企業(yè)相繼推出了新型流式細胞儀，不單將原本需要一支工程師隊伍進行安裝的大型設(shè)備壓縮成為可以單人運送的緊湊型儀器，并讓這一原本需要專人專業(yè)培訓(xùn)才能上手的復(fù)雜技術(shù)變得更加容易操作，而也價格也更加實惠——目前的流式細胞儀分析系統(tǒng)設(shè)置大部分都是自動化的， 相關(guān)試劑盒也經(jīng)過了多次驗證，簡化了操作，降低了入門門檻。一些大型的公司，比如Sony和BD加大了研發(fā)力度，開發(fā)出了10萬美元以下的流式細胞儀，在美國其客戶群開始由中心實驗室轉(zhuǎn)向了個人實驗室。

雖然簡化了操作，但是這些新型的流式細胞儀也不是說就能立即上手的，用戶在購買之前要弄清楚這一技術(shù)到底能做什么，不能做什么，有時實驗室購買了流式細胞儀后覺得又不適用了，這樣即浪費資源，也耽誤時間，因此了解自己需要什么，了解不同儀器的優(yōu)缺點十分重要。以下是目前市面上較受關(guān)注的幾個新型流式細胞儀，通過分析它們的優(yōu)點和缺點，也許您在選購的時候就更有目的性了。

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代表著流式細胞儀重要創(chuàng)新、市場上*臺用聲波控制細胞移動的流式細胞計數(shù)系統(tǒng)，是一款由美國能源部國家實驗室（洛斯阿拉莫斯國家實驗室）研制的新型流式細胞分析儀，去年春天由ABI（Life Technologies）公司投入到了市場，不單榮獲了The Scientist雜志2010創(chuàng)新技術(shù)，也被生物通讀者投票入選2010年生物通生命科學創(chuàng)新產(chǎn)品。

流式細胞儀的原理在于讓細胞逐個穿過激光檢測設(shè)備，從而使科學家們得以對細胞進行計數(shù)和檢測。過去，研究人員必須在其靈敏分辨率和樣品進樣分析速度兩者之間二選一，取其平衡點。原因在于傳統(tǒng)的流式細胞儀由快速流動的鞘液流帶動樣品軸流經(jīng)過激光檢測器。要加大樣品進樣分析速度就必須加大樣品軸流直徑，這意味著樣品流中細胞分散度擴大，細胞容易偏離激光檢測焦點——細胞偏離激光中心越遠則激發(fā)光強度變化越大，CV值越高——這就導(dǎo)致樣品分辨率下降——因此過去往往要為靈敏度而犧牲通量。

Attune聲波聚焦流式細胞儀通過一個看似簡單的原理——利用超聲波（超過2 MHz，類似于醫(yī)學成像中使用的超聲波）將細胞緊密聚集在激光檢測點的樣品軸流中軸線上，避免細胞隨軸流加寬而分散。這種聲波聚焦在很大程度上與樣品進樣流速無關(guān)，不論樣品流與鞘液流的比例如何，都可以使細胞緊密地聚集于激光檢測焦點，避免分散。即使是在高達1 mL/min的高樣品流速下，照樣可以維持的細胞排列——Attune流式細胞儀實現(xiàn)了在高進樣流速下的高檢測，能夠同時將速度和分辨率zui大化，并在檢測點開展cell-by-cell的細胞分析，解決了過去需要在靈敏度和速度之間折中的這個矛盾。所獲得的數(shù)據(jù)CV值低，峰更窄，峰分辨率高，分離更好，且數(shù)據(jù)更易闡釋。

Attune實現(xiàn)這一切并不需要采用可能傷害細胞的高速或大體積鞘流。由于不受物理鞘液流的限制，因而操作人員可以控制細胞通過激光光路的時間，這就意味著在分析微弱信號時，還可以減慢細胞的流速，延長細胞被照亮的時間，以便采集更多的光量子，從而獲得更清楚明確的結(jié)果以及更好地分離。高精度進樣泵還可完成細胞計數(shù)——進一步將費用和樣品制備時間降低。

Attune每次運行可收集高達2,000萬個細胞，流速可高達1000 μL/min，比其他細胞儀快10倍以上，且收集速率可在25-1,000 μL/min之間進行調(diào)整，4分鐘內(nèi)分析多達4 mL樣品！

顯著提高的樣品收集速率和高樣品量對實驗意味著什么？用戶能更有效地分析相對稀釋的樣品，比如干細胞，腦脊液（CSF），或任何細胞數(shù)量低的稀有樣品，因為樣品中的顆粒能在檢測點聚集。難收集的樣品，如小鼠血液和骨髓、細針穿刺液或細胞少的樣品，都可以進行染色然后稀釋，而無需清洗或裂解RBC。在樣品制備過程中沒有發(fā)生樣品損失，所有珍貴樣品都能進行全盤檢測。另外全血樣品可以省去樣品制備，無需清洗和裂解紅細胞（RBCs），避免細胞損失和損傷，而不折損數(shù)據(jù)質(zhì)量。

Attune聲波聚焦流式細胞儀是405nm紫色激光和488nm藍色雙激光設(shè)計，其中紫色激光要比其它一些經(jīng)濟型流式細胞儀中用到的標準激光馬力更大，目前Life Technologies也針對這一儀器推出了優(yōu)化探針，更有利于研究人員實驗操作。

Attune聲波聚焦流式細胞儀可幫助科學家們實現(xiàn)對細胞群體中大量異質(zhì)細胞進行統(tǒng)計學數(shù)據(jù)的采集，以便研究包括大小、復(fù)雜性、表型和健康情況在內(nèi)的細胞群體參數(shù)。Attune的技術(shù)可讓科學家們獲得更高的靈敏度，通過增加通量來節(jié)約時間，并可用于體積小的樣品。

除此之外，Attune在提供這些升級性能的同時，還憑借緊湊的聲學技術(shù)而實現(xiàn)了體積小，以及開展實驗所需的消耗品量更少等優(yōu)勢。這些*的特征將有助于實現(xiàn)傳統(tǒng)細胞儀系統(tǒng)所無法實現(xiàn)的科研應(yīng)用，從樣品分離制備到微珠為基礎(chǔ)的樣品分析。

去年舊版本的Attune并沒有安裝紅色激光——這是一些用戶比較喜歡的光源。而且在一些常用的流式細胞分析過程中，樣品都是高濃度，低體積的，如果用Attune，還要購買價格稍貴的tag，可能劃不來。不過生物通編輯剛剛得到的資料表明，版的Attune已經(jīng)在原有的藍色/紫色激光基礎(chǔ)上新增加了藍色/紅色激光配置，這樣就可以根據(jù)個人的習慣選擇激光配置了。

如何面對突發(fā)疫情，Illumina即將推出MiSeq系統(tǒng)，歡迎索取相關(guān)技術(shù)資料>> >>

Accuri C6 Flow Cytometer歡迎索取相關(guān)技術(shù)資料>> >>

今年2月，BD公司（Becton, Dickinson and Company） 收購了美國密歇根州Ann Arbor市的Accuri Cytometer公司，這家公司是一家開發(fā)和生產(chǎn)科研型個人化流式細胞儀的儀器制造商。而C6 Flow Cytometer就是Accuri Cytometer公司的一款旗艦產(chǎn)品。

Accuri C6流式細胞儀相關(guān)產(chǎn)品有助于BD進入到新興的低成本個人化流式細胞儀市場，這也就是說C6流式細胞儀這款全功能、雙激光、六探測器的流式細胞儀分析系統(tǒng)具備操作簡單，成本底的特點。

首先C6流式細胞儀能避免操作新手的一個容易犯的錯誤——調(diào)整電壓，同步化不同的細胞。一般來說，只要關(guān)閉了電壓設(shè)施，那么就不可能再恢復(fù)數(shù)據(jù)了，除非你愿意重新來一次。而且在流量控制方面，C6流式細胞儀采用的是低壓流動系統(tǒng)（蠕動泵），而不是真空泵，因此可以控制樣本進樣速度和活性區(qū)流的直徑，這就能為樣本選擇*的活性流區(qū)的大小。

在性能方面，C6流式細胞儀的探測器不但可靈敏的捕獲前散射光和旁散射光，還有四個可調(diào)光學濾光片的熒光探測器。這一臺儀器可以實時收集1600萬個通道的數(shù)據(jù)，在分析過程中，C6流式細胞儀的動態(tài)范圍消除了對探測器進行補償?shù)谋匾?，當使用Cflow軟件的Zoom function模式觀察一個特定通道時，其他數(shù)據(jù)仍然被監(jiān)測并且記錄到數(shù)據(jù)文件。

Cflow軟件是C6流式細胞儀的操作分析系統(tǒng)，這一操作系統(tǒng)能簡單快速的搜集分析數(shù)據(jù)加上高集成度、高度自動化的主機，以及優(yōu)良人機界面，研究人員經(jīng)過半個小時的培訓(xùn)，就可以靈活、準確的使用C6流式細胞儀系統(tǒng)。

除此之外，C6流式細胞儀安裝和維護也很簡單，這一系統(tǒng)擁有自動除污和清洗流路程序。當關(guān)閉主機時，自動化系統(tǒng)會自動用清洗液清洗流路系統(tǒng)，然后再使之充滿鞘液。鞘液會保持在流路系統(tǒng)中，直到下次開機。在使用過程中，如果需要啟動清洗流程，那么點擊一下鼠標就可以了。

而且現(xiàn)在，如果購買的機器出了問題不能解決，Accuri還會在維修機器期間，給用戶寄另外一臺機器來替換使用，避免耽誤實驗。

當然這臺機器也存在其缺點，首先C6流式細胞儀的軟件系統(tǒng)還在發(fā)展階段，缺乏一些功能，比如其軟件系統(tǒng)由于圖形不能擴展，因此無法得到高質(zhì)量的圖像。要解決這個問題，可以采用第三方軟件，比如FlowJo進行編輯。

另外C6流式細胞儀設(shè)計小巧靈便，這是其優(yōu)點也是其缺點，因為容量問題也限制了它可容納的激光源和檢測器的數(shù)量。zui后這一儀器沖洗速度比同類型其它一些機器慢，因此如果樣品比較多，可能比較費時間。

Partec CyFlow Cube 6

德國Partec公司成立于1967年，是流式細胞儀的制造*，曾在1968年生產(chǎn)出了*臺商用流式細胞儀，憑借數(shù)十年的研制經(jīng)驗和眾多流式分析的技術(shù)，Partec公司成為世界上的流式細胞儀制造商及供應(yīng)商。
Partec公司生產(chǎn)的CyFlow系列流式細胞儀掌握了多項關(guān)鍵性技術(shù)，也是世界上*升上太空的流式細胞儀。其中Cube 6是CyFlow系列推出的新款流式細胞儀，這款高性能，低成本的流式細胞儀適用于實驗室常規(guī)研究分析，可用于醫(yī)療保健、微生物分析、工業(yè)農(nóng)業(yè)應(yīng)用等。

CyFlow Cube 6是一種超小型流式細胞儀，有兩種激光方式可選：Forward Scatter （FSC）, Side Scatter （SSC）（光源有多個選擇），并配有4色熒光通道（FL1-FL4）。由于其高性能的UV LED選項，CyFlow Cube 6能進行高分辨率DNA分析。

Partec公司的Cube系列產(chǎn)品還具有一個重要的特點，就是能隨著實驗室研究內(nèi)容的變化，而擴充其應(yīng)用范圍。一般實驗室隨著本身研究內(nèi)容的發(fā)展，會出現(xiàn)不同的實驗分析需要，Cube系列產(chǎn)品包含有不同的模塊選擇，可以根據(jù)自身的需要選擇升級選項。

除此之外，CyFlow Cube 6相對而言也比較便宜——美國本地價格為3.5萬美元，一些小型實驗室或者預(yù)算有限制的實驗室可以考慮下這一產(chǎn)品。

Millipore Guava歡迎索取相關(guān)技術(shù)資料>> >>

密理博guava easyCyte系列產(chǎn)品（2009年密理博收購Guava Technologies公司）有EasyCyte 5、6和8三個成員，這一系列機器是*利用微毛細管技術(shù)為核心的細胞分析平臺，摒棄了傳統(tǒng)的鞘液流方式，采用*的微毛細管液流（上樣）設(shè)計，因而不需要鞘液，減少樣本和樣本處理時間和試劑。相關(guān)產(chǎn)品簡單便捷，zui基礎(chǔ)的EasyCyte 5就是一個簡單單激光，能檢測三種顏色的機器。

easyCyte系列產(chǎn)品的優(yōu)點主要在于系統(tǒng)不需要鞘液，這樣每8小時的廢液產(chǎn)生量不超過50ml。且上樣體系小，每個test只需1000-10000個細胞，減少樣本和樣本處理時間和試劑。Guava *的上樣系統(tǒng)預(yù)設(shè)了1塊96孔板與10個單樣品管（1.5ml或0.5ml tube）的位置，使得高通量上樣與中低通量上樣可同時完成，避免了從中低通量到高通量上樣時需要手動切換所帶來的麻煩。

另外在一些應(yīng)用方面，easyCyte操作簡便，比如細胞凋亡檢測實驗，采用類似Annexin V.標準檢測試劑盒的標記物，及其自帶的分析軟件模塊，就能分析數(shù)據(jù)了。

獲得生物通2009年年度創(chuàng)新產(chǎn)品稱號的guava easyCyte™ 8HT細胞分析儀，其軟件系統(tǒng)發(fā)展得更加完善，在采訪過程中，我們了解到Guava設(shè)計了兩款智能化軟件控制，以配合不同層次的需求。guavaSuite就是一套為細胞凋亡研究的學者而設(shè)計的軟件，包括了Annexin V, Tunel, Cell Cycle等經(jīng)典實驗，同時可以進行細胞計數(shù)和細胞毒實驗的研究。

這一軟件zui大的特點是預(yù)設(shè)了補償參數(shù)和實驗?zāi)K，一鍵式完成實驗數(shù)據(jù)的獲取。Incyte軟件是為高通量數(shù)據(jù)分析度身定做的軟件，通過Incyte HeapMap功能可同時顯示6*96個數(shù)據(jù)信息，直觀化的信息顯示更有效地幫助學者做出快速準確的判斷。另一方面，Millipore地將并IC50/EC50的分析功能切入流式分析軟件中，可通過一組凋亡數(shù)據(jù)獲得凋亡分析結(jié)果和IC50/EC502項結(jié)果。

除此之外，easyCyte的系統(tǒng)和維護也是自動化的，這也就是說沒有經(jīng)驗的研究人員也可以成功地操作這一機器。

另外一個方面，佛羅里達大學流式細胞儀科技主任Neal Benson認為，從理論上說，微毛細管系統(tǒng)分析儀可能會比傳統(tǒng)流式細胞儀更容易堵塞，尤其是分析大微粒的時候，這些微粒流動的慢，可能會引起流動微粒阻隔。Benson表示他并不清楚Guava在實際操作上是否更容易出現(xiàn)這個問題，而且他也承認各種流式細胞儀都時不時會出現(xiàn)堵塞的問題。生物通編者特別為此咨詢過Millipore的技術(shù)專家，專家表示Guava *的設(shè)計能有效解決這個問題，詳細的細節(jié)歡迎關(guān)注生物通后繼推出的技術(shù)解密報告。