Elisa檢測試劑盒具有敏感性高、特異性強、操作簡單等優(yōu)點,被廣泛應用于各種抗原和抗體的測定,為輔助臨床診斷與生物科研起到了積的作用。
Elisa檢測試劑盒檢測中顯色液A和B有什么作用?
酶聯(lián)免疫診斷試劑盒的底物A就是顯色劑A(含過氧化氫)為供氫體(DH2),底物B就是顯色劑B(含TMB),用于顯色。另外,常用的底物還有:
AP的底物,常用的為對-硝基苯磷酸脂(PNP),其反應物為黃色的對硝基酚,測讀波長為405nm2)GOD的底物,為葡萄糖,供氫體為對硝基藍四氮唑,反應產(chǎn)物為不溶性的藍色沉淀。
什么是TMB?TMB即四甲基聯(lián)苯胺是種脂溶性較強的基團,因此容易進入細胞與細胞器中的HRP反應,且由于這種高度的脂溶性,使其易形成多聚體,在HRP活性部位產(chǎn)生粗大的、深蘭色沉淀物,這使得TMB成為組化實驗中的種很好的發(fā)色團。同時反應產(chǎn)物的沉淀,使得HRP的活性部位更加暴露,利于酶氧化反應進行。
TMB的反應產(chǎn)物為深藍色,利于光鏡觀察,且反應產(chǎn)物越聚越大,常超出單個細胞器的范圍(而DAB則被限制在其內(nèi)),故TMB反應的檢測閾較低。
由于上述優(yōu)點,目TMB常用于光鏡及超微結(jié)構(gòu)水平的HRP及HRP-WGA神經(jīng)投射的研究。需要注意的是:Elisa檢測試劑盒顯色液中的A液和B液應在2h內(nèi)新鮮配制。另外,TMB是種較強的皮膚刺激劑,并有致癌的潛在可能,故使用時應帶手套及在通風條件下操作。
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