在流式細胞檢測技術發(fā)展的幾十年中,熒光成為了其發(fā)展軌跡上重要代名詞之一。在流式細胞檢測實驗中,應用各種熒光素標記抗體是必不可少的。那么常用的流式熒光染料有哪些呢?
一、有機小分子
這類染料是具有歷史、應用廣泛且相對較小的熒光化合物。有了國外研究基礎,國內(nèi)公司也陸續(xù)開始擁有自己專屬染料。
二、藻膽蛋白
從各種藻類中提取的大蛋白分子。與化學合成熒光染料相比,藻膽蛋白熒光量子產(chǎn)率超過90%、具備相對高的消光系數(shù),且能夠發(fā)出強烈熒光信號。
在聚合物染料沒出現(xiàn)之前,PE和APC是亮的染料,也是搭配低豐度抗原選擇。不過,藻膽蛋白很容易受光漂白影響,因此不推薦長時間或反復暴露于激發(fā)源的應用。
三、串聯(lián)染料
一個具有供體染料分子的激發(fā)和受體染料分子的發(fā)射性質(zhì)的獨特熒光基團。利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的現(xiàn)象,即兩個熒光分子中供體的發(fā)射光譜與受體的激發(fā)光譜重疊,且位置上距離很近時,會產(chǎn)生能量的轉(zhuǎn)移情況,此時供體熒光分子的熒光信號發(fā)生淬滅,而受體熒光分子的熒光強度顯著增強。
比起單分子染料,串聯(lián)染料不僅在熒光亮度上明顯增強,還可在單一激發(fā)器中實現(xiàn)更大的發(fā)射波長,使得檢測紅外區(qū)域的光譜成為可能。一個激發(fā)光源就可以使用多個染料進行研究,這依賴于串聯(lián)染料擴展斯托克斯位移值(150-300nm),即激發(fā)與發(fā)射波長的差值。
隨著科研、IVD領域技術勢頭飛速發(fā)展,儀器不斷地迭代更新,流式細胞檢測技術手段已經(jīng)十分成熟,僅僅單激光、單通道的流式分析,已經(jīng)不能滿足科研人員需求,目前的單激光、多通道流式檢測技術,無論在免疫療法、細胞分選、生物制藥等其它領域都受到高度青睞。
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