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蛋白質(zhì)電泳試劑PAGE凝膠銀染試劑盒
貨號: G7210
規(guī)格: 1L
保存: 室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復(fù)檢期 12 個(gè)月。
| 試劑盒內(nèi)容 ： | G7210 |
| 硝酸銀 | 2g |
| 染色液 A | 100ml |
| 顯色液 B | 100ml |
| 顯色液 C | 100ml |
| 終止液 D | 100ml |
注：1L 規(guī)格指可配制的硝酸銀染色液的體積，實(shí)際使用次數(shù)根據(jù) PAGE 膠大小不同而不同。
產(chǎn)品簡介:
核酸銀染的原理是銀離子可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物，然后用還原劑如甲醛在堿性環(huán)境下使 Ag+還原成銀顆粒，可把核酸電泳帶染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色。其靈敏度比 EB 高 200 倍，該產(chǎn)品整個(gè)過程只需要 20 分鐘，操作簡單，靈敏度高，能檢測到 10ng 以下的 DNA 條帶。
聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺(簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(簡稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE)
SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液，SDS可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu)，β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。SDS還與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷，這時(shí)各種蛋白質(zhì)分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時(shí)，就消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷及結(jié)構(gòu)上的差異，電泳速度只是與蛋白質(zhì)分子量有關(guān)。用本法測定蛋白質(zhì)的分子量只需根據(jù)待測蛋白質(zhì)在已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)圖中的位置，就能得知分子量。
操作步驟:
一、染色液配制
需要配制的染色液體積根據(jù) PAGE 膠的大小而定，一般的 mini-PAGE 膠需要 20-30mL。配制用的器皿清洗干凈后用去離子水涮洗，染色液須用去離子水配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。如果配制的溶液體積不是 100mL，可以按比例改變各成分用量。
1，硝酸銀染液：稱取 0.2g 硝酸銀，加入到 90ml 去離子水中*溶解，加入 10ml 溶液 A 混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
2，顯色液：分別取溶液 B 和溶液 C 各 10ml 加入 80ml 去離子水中混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3，終止液：取終止液 D 10ml 加去離子水稀釋 100ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二、染色：
1，PAGE 電泳結(jié)束后，將 PAGE 蛋白膠轉(zhuǎn)移玻璃平皿或搪瓷盤中，用去離子水漂洗兩遍，每次 2min。
2，將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移硝酸銀染液中，使染液沒過 PAGE 膠，室溫染色 10min?？芍糜趽u床上緩慢搖晃，使其染色均勻。
3，棄去染色液，用去離子水快速漂洗三次，每次半分鐘。
4，將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移顯色液中，使顯色液沒過 PAGE 膠，室溫?fù)u晃顯色條帶清晰可見。
5，可選，將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移終止液中，終止顯色 1min。
6，銀染后 PAGE 膠可拍照保存或用于后續(xù)試驗(yàn)。
注意事項(xiàng) ：
1. 銀染主要出現(xiàn)在 PAGE 膠的表面，使用薄膠（0.5-0.75mm）可以提高靈敏度。
2. 對于考馬斯亮藍(lán)染色的 SDS-PAGE 膠，可用甲醇將膠漂洗后，繼續(xù)進(jìn)行銀染。考染過程中的乙酸會干擾銀染，因此要確保將 PAGE 凝膠中殘留的乙酸*洗凈。
3. 不同蛋白質(zhì)對銀染的反應(yīng)是不一樣的，尤其是堿性蛋白染色效果差。因此，不宜用銀染測定不同蛋白的比例。
4. 染色過程中，緩慢的振蕩是必要的，一般選擇 40-60 rpm.
5. 凝膠表面的裂紋多是由于壓力、手印及表面干燥所致，所以全程中都應(yīng)帶手套操作。
6. PAGE 凝膠背景呈均一的黑色多是水中的雜質(zhì)引起的，所以溶液的配制應(yīng)使用電導(dǎo)率小于 1 µS 的去離子水。
7. 如果染色后有呈灰塵或煙霧狀灰色或棕色的沉淀出現(xiàn)在凝膠表面，可能是在幾步漂洗過程中洗得不夠*，或是染色過程時(shí)溫度太低。
8. 較深的銀染背景多是丙烯酰胺中的雜質(zhì)所致。
9. PAGE 膠中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100 和兩性電解質(zhì)這些物質(zhì)會干擾銀染。
10. 室溫操作時(shí)，溫度的波動往往會干擾銀染的效果，恒溫水浴可以解決這個(gè)問題。
11. 憑借戊二醛預(yù)處理可以使各種蛋白質(zhì)的染色提高 40 倍。
12. 染色使用的玻璃器皿必須非常干凈，用酸浸泡可以滿足要求。
13. 銀染應(yīng)盡快照相，隨著時(shí)間延長，蛋白條帶會變淺，而背景會加深。
14. 銀染容器理想的是玻璃平皿，其次是搪瓷盤和密胺塑料盤等。
相關(guān)產(chǎn)品 ：
P1305 考馬斯亮藍(lán)染色液
P1300-500 考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液
P0012 10× 麗春紅染色液
PR1400 低分子量蛋白 MARKER
PR1700 預(yù)染次高分子量蛋白 MARKER
P1300 SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒
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3、部分產(chǎn)品價(jià)格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。
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