目錄:北京索萊寶科技有限公司>>蛋白質(zhì)研究>>蛋白質(zhì)電泳>> P1320蛋白質(zhì)電泳試劑Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 25T |
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貨號 | P1320 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
主要用途 | 常規(guī)的Tris-SDS-PAGE電泳的只能分辨大分子蛋白,對于相對分子量小的 |
蛋白質(zhì)電泳試劑Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
貨號 :P1320
規(guī)格 :25 塊/50 塊/100 塊 PAGE 凝膠
產(chǎn)品內(nèi)容 :
25T | 50T | 100T | 保存條件 | |
49.5%T 3%C | 15ml | 30ml | 60ml | 2-8℃,避光 |
49.5%T 6%C | 50ml | 100ml | 200ml | 2-8℃,避光 |
凝膠緩沖液 | 70ml | 140ml | 280ml | 2-8℃ |
50%甘油 | 30ml | 60ml | 120ml | 室溫 |
APS | 0.25g | 0.5g | 1.0g | 室溫 |
TEMED | 400ul | 750ul | 1.5ml | 室溫,避光 |
說明書 | 一份 | 一份 | 一份 |
本產(chǎn)品所提供的 APS(過硫酸銨)為固體粉末,使用前加入雙蒸水溶解即配制成 10%APS 溶液(0.5g APS加 5ml 雙蒸水) ,將溶液分裝后置于-20℃保存,通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置 4℃保存兩周。
產(chǎn)品簡介 :
常規(guī)的 Tris-SDS-PAGE 電泳的只能分辨大分子蛋白, 對于相對分子量小的, 尤其是 10 kD 以下的蛋白分辨率極低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分離分子量在 1-10 kD 的蛋白及多肽,成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chǎn)品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝膠制備所需全套試劑,只需自備蒸餾水,即可制備高質(zhì)量各種濃度的凝膠,方便、快捷,電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N,N,N,N—四甲基乙二胺(簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(簡稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠,以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis,簡稱PAGE)
SDS-PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液,SDS可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵,破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu),β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。SDS還與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷,這時各種蛋白質(zhì)分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時,就消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷及結(jié)構(gòu)上的差異,電泳速度只是與蛋白質(zhì)分子量有關(guān)。用本法測定蛋白質(zhì)的分子量只需根據(jù)待測蛋白質(zhì)在已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)圖中的位置,就能得知分子量。
注意事項 :
1、 10%APS 配制后分裝-20 度保存。 APS 溶液不穩(wěn)定, 應(yīng)盡量減少室溫存放時間, 每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間延長,應(yīng)考慮更換,使用-20 度保存的 10%APS。
2、在凝膠配制過程中,尤其是液體混勻步驟,應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
3、在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作,加水時速度不能太快。
4、丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性,操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。
5、本產(chǎn)品僅用于科研,不能用于人體實驗或人體治療。
配膠說明 :
根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的 PAGE 分離膠配制濃度,凝膠濃度配方參考附表。
分離膠 | 夾層膠 | 濃縮膠 | |||
20%/4.5ml | 16.5%/4.5ml | 15.5%/4.5ml | 10%/2ml | 4%/2ml | |
49.5%T 3%C | / | / | / | 0.407ml | 0.160ml |
49.5%T 6%C | 1.82ml | 1.50ml | 1.395ml | / | / |
凝膠緩沖液 | 1.50ml | 1.50ml | 1.50ml | 0.667ml | 0.496ml |
50%甘油 | 0.96ml | 0.96ml | 0.96ml | / | / |
ddH 2 O | 0.22ml | 0.54ml | 0.645ml | 0.926ml | 1.344ml |
10%APS | 40µl | 40µl | 40µl | 20µ| | 20µ| |
TEMED | 5µl | 5µl | 5µl | 3µl | 3µl |
I 配制分離膠
1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C 、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。
2、加入 10%APS 和 TEMED,立即渦旋混勻 5-10 秒,以使溶液充分混勻。
3、在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1 mm mini-gel,分離膠溶液加約 4 ml ) ,然后在分離膠溶液上輕輕 覆蓋一層 1-3 cm 的水層,使凝膠表面保持平整。
4、靜置,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
II 配制夾層膠
去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水盡量吸去。
1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
2、加入 10%過硫酸銨和 TEMED,立即渦旋混勻 5-10 秒,以使溶液充分混勻。
3、將適量的夾層膠溶液迅速加分離膠的上面(對于 1 mm 的 mini-gel,夾層膠溶液加約 1 ml ) , 然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層,使凝膠表面保持平整。
4、靜置,待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
III 配制濃縮膠
去除覆蓋在夾層膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。
1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
2、加入 10%過硫酸銨和 TEMED,立即渦旋混勻 5-10 秒,以使溶液充分混勻。
3、將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。
4、待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。
5、進行電泳操作。
IV 電泳
將電泳槽放入 4℃或冰水浴中,外槽加入陽極緩沖液(T1225) ,內(nèi)槽加入陰極緩沖液(T1215) ,30V 預(yù)電泳10min,將樣品(已經(jīng)過 Tricine 上樣緩沖液 P1325 處理)加入點樣孔后 30V 電泳 1 小時,100V 電泳溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳,進行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。
相關(guān)產(chǎn)品 :
PC0020 BCA 蛋白濃度測定試劑盒
P1200 SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒
P1325 2 × Tris-Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液 ( 含 DTT)
T1215 1 × Tris-tricine-SDS-PAGE 電泳緩沖液(陰極 - )
T1225 1 × Tris-tricine-SDS-PAGE 電泳緩沖液(陽極 + )
PR1300 超低分子量蛋白 MARKER
P1300-500 考馬斯亮藍(lán)快速染色液
蛋白質(zhì)電泳試劑Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。
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參考文獻(xiàn):
《A deuterohemin peptide protects a transgenic Caenorhabditis elegans model of Alzheimer’s disease by inhibiting Aβ1–42 aggregation》 作者:Jia Xu,Ye Yuan,Ruining Zhang,Yanhui Song,Tianzhuo Sui,Jiaqi Wang,Chonghan Wang,Yujia Chen,Shuwen Guan,Liping Wang 期刊:Bioorganic Chemistry 影響因子:2.141 PMID:30428413
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