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胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC0405
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：用時加入20 mL提取液溶解；

2. 試劑二：用時每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用；

3. 試劑三：用時每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用；

4. 工作液配制：將試劑一、試劑二、試劑三按85：1：1的比例混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸，同時還原NADP⁺生成NADPH。ICDHc是細胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源，在逆境中該酶活性通常會發(fā)生顯著變化。
利用ICDHc催化NADP⁺還原成NADPH反應(yīng)，在340nm下測定NADPH濃度的增加，即可反映ICDHc活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。若初始值A1大于0.5可嘗試將酶液用提取液稀釋。

2. 實驗時，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活；工作液37℃水浴放置。

3. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

4. 最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

實驗實例：

1. 取0.1g稗草，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，然后8000g 4℃離心10min，取上清，之后按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA=A2-A1=0.2285-0.2139=0.0146，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

ICDHc活性（U/g 質(zhì)量）=1608×ΔA÷W=234.768 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g小鼠腎組織，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，然后8000g 4℃離心10min，取上清稀釋10倍，之后按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA=A2-A1=0.5989-0.1263=0.4726，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

ICDHc活性（U/g 質(zhì)量）=1608×ΔA÷W×10=75994.08 U/g 質(zhì)量。
參考文獻：

1. Miake F, TORIKATA T, KOGA K, et al. Isolation and characterization of NADP+-specific isocitrate dehydrogenase from the pupa of Bombyx mori[J]. The Journal of Biochemistry, 1977, 82(2): 449-454.

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