目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>其它系列>> BC4080-50T/48S肉桂酸-4-羥化酶活性檢測試劑盒 其他系列
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
| 貨號 | BC4080 | 應用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 肉桂酸-4-羥化酶（C4H）活性檢測 |
肉桂酸-4-羥化酶（C4H）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC4080
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體60mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前取一瓶粉劑加入3 mL乙醇溶解備用。2-8℃保存4周。
試劑三：臨用前取一瓶粉劑加入3 mL雙蒸水充分溶解待用?，F(xiàn)配現(xiàn)用。-20℃分裝可保存4周，避免反復凍融。
產(chǎn)品說明：
C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶，是催化桂皮酸形成咖啡豆、香豆酸的酶。C4H多存在于高等植物、酵母、菌類中，屬于細胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶。
C4H催化肉桂酸和NADPH生成4-香豆酸鹽和NADP，在340nm下測定NADPH的減少速率，即可反映C4H活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。12000g， 4℃離心15分鐘，取上清，置冰上待測。
2、細胞或細菌樣本的制備：先收集細胞或細菌樣本到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200w，超聲3s，間隔10s，重復30次）。12000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
紫外分光光度計預熱30min，波長調(diào)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
加樣表（在1mL石英比色皿中分別加入）
| 試劑名稱（μL） | 測定管 |
| 試劑一 | 700 |
| 試劑二 | 100 |
| 試劑三 | 100 |
| 樣本 | 100 |
充分混勻后立即測定10s時在340nm下的吸光度，記為A1，之后迅速將其放入37℃水浴或37℃培養(yǎng)箱中3min。然后迅速拿出擦凈后測定190s時的吸光度，記為A2。計算ΔA=A1-A2。
注意事項：
當ΔA大于0.4時，建議將樣本用提取液稀釋后測量；ΔA過小時，建議增加酶促反應時間（5min或10min）或增加加入的樣本體積來測定。
實驗實例：
取0.1g黃豆（發(fā)芽）加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A1-A2=1.643-1.510=0.133，按樣本質(zhì)量計算酶活得：C4H酶活（U/g質(zhì)量）=535.91×ΔA÷W=535.91×0.133÷0.1=712.76 U/g 質(zhì)量。
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