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索萊寶預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker(3.3kD-31.0kD)跑膠怎么樣
貨 號 : PR1900
規(guī) 格 : 20T(200µ1)
保存 : -20℃保存,有效期為一年。避免反復(fù)凍融,建議分裝凍存。
產(chǎn)品說明:
本產(chǎn)品包含預(yù)染的3種多肽和2種低分子量蛋白質(zhì)組成,分子量范圍為3. 3kD-31. 0kD??梢杂糜谥苯佑^察蛋白質(zhì)電泳狀況以及清晰地判斷Western Blot的轉(zhuǎn)膜效果。經(jīng)Tricine-甘油SDS-PAGE凝膠電泳時以及轉(zhuǎn)移到PVDF或NC膜上可看到清晰的5條藍(lán)色的蛋白條帶。 本品為蛋白質(zhì)和多肽混合物的凍干粉, 每種預(yù)染蛋白含量約為40µg,配有一支1×上樣緩沖液。
使用說明:
1. 開封后,溶于200 µ1 1×上樣緩沖液,可根據(jù)需要進(jìn)行小量分裝,每管10 µl,-20℃貯存,每次取一管使用,避免反復(fù)凍融。
2. 使用前取分裝后的小管室溫融化后即可上樣電泳。
電泳示意圖:
凝膠的配置方法:
凝膠制備及染色注意事項:
1. 先配制分離膠,聚合后再配制夾層膠,后配制濃縮膠,3種膠的制膠體積比為4:1.5:1。電泳時,30v跑1-2小時后,待指示前沿到達(dá)分離膠上沿時,把電壓調(diào)100v,電泳結(jié)束,整個電泳過程大約需要6-8小時。
2. 電泳之后可將膠置于固定液中固定 20 分鐘,再進(jìn)行染色,能得到較好的蛋白條帶;如時間不允許,也可不進(jìn)行固定直接染色。如果使用配方 7 進(jìn)行染色時效果不好或考慮其毒性,請選擇本公司的考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液(貨號:P1300),該產(chǎn)品具有染色快,無毒,靈敏性高等特點,是常規(guī)染色液的替代品。
3. 由于多肽所含的氨基酸數(shù)目較少,因此如該多肽含有過多的極性氨基酸(堿性或酸性),則會影響其在SDS-PAGE 圖上的條帶遷移率,即其表觀分子量可能和多肽的氨基酸理論推算分子量有一定距離。
4. 由于 SDS-PAGE 的圖譜上,蛋白質(zhì)對數(shù)分子量和遷移率成正比直線關(guān)系的分子量范圍為 15,000-200,000,因此對于分子量小于 10000 的蛋白質(zhì)或多肽的分子量,只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)分子量進(jìn)行估計,推斷其是否落入預(yù)測的分子量范圍。
5. 由于超低分子量多肽(3000及3000以下),極易從凝膠上浸出,因此染色及脫色時間不宜太長,脫色后凝膠也不宜在水中浸泡保存過久,否則條帶會消失。
北京索萊寶自產(chǎn) 預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker(3.3kD-31.0kD)
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附: 小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE 電泳試劑配制
1. 49.5% T 3 % C (配制夾層股和濃縮膠)
丙烯酰胺 48g
甲叉雙丙烯酰胺 1.5g
用ddH 2 0溶解后定容100ml
2. 49. 5 % T 6 % C (配制分離膠)
丙烯酰胺 46. 5g
甲叉雙丙烯酰胺 3. 0g
用ddH 2 0溶解后定容100ml
3. 凝膠緩沖液
Tris堿 182g
ddH 2 0 300ml
用HCl調(diào)節(jié)pH值8.45
用ddH 2 0定容 500ml
再加入SDS 1.5g
4 . 10×陽極緩沖液(下槽緩沖液〕
Tris堿 121. 1 g
ddH 2 0 400ml
用HCl調(diào)pH值8.9
用ddH 2 0定容 500ml
5. 陰極緩沖液(上槽緩沖液)
Tris堿 12 .11g
Tricine 17.92g
SDS 1g
用ddH 2 0定容1000ml
此溶液不用調(diào)節(jié)pH值
6. 固定液
0.5% 戊二醛
30% 乙醇
用ddH 2 0定容100ml
7. 染色液
50% 甲醇
10% 乙酸
0.2% 考馬斯亮藍(lán)G-250
用ddH 2 0定容500ml
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