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          目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>糖酵解系列>> BC5340-50T/24SL -乳酸(L -LA)含量檢測試劑盒 糖酵解

          L -乳酸(L -LA)含量檢測試劑盒 糖酵解
          • L -乳酸(L -LA)含量檢測試劑盒 糖酵解
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
          • 型號 BC5340-50T/24S
          • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
          • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
          • 所在地 北京市
          屬性

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          更新時間:2024-04-19 15:06:25瀏覽次數(shù):672評價

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          CAS 詳詢 純度 詳詢
          分子量 詳詢 分子式 詳詢
          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/24S
          貨號 BC5340 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
          主要用途 L -乳酸(L -LA)含量檢測
          L -乳酸(L -LA)含量檢測試劑盒 糖酵解
          有效期
          6個月
          儲存條件
          -20℃
          單位

          英文名稱
          Lactic acid(LA) content Assay Kit
          檢測方法
          可見分光光度法 Spectrophotometer
          規(guī)格
          50T/24S

          L-乳酸(L-LA)含量檢測試劑盒(WST顯色法)說明書

          可見分光光度法

          注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

          貨號:BC5340

          規(guī)格:50T/24S

          產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

          試劑名稱

          規(guī)格

          保存條件

          提取液一

          液體30 mL×1

          2-8℃保存

          提取液二

          液體5 mL×1

          2-8℃保存

          試劑一

          液體20 mL×1

          2-8℃保存

          試劑二

          液體60 μL×1

          2-8℃保存

          試劑三

          粉劑×1

          -20℃保存

          試劑四

          液體12 mL×1

          2-8℃保存

          標(biāo)準(zhǔn)品

          粉劑×1

          2-8℃保存

          溶液的配制:

          1、 試劑二:臨用前按試劑二(V):蒸餾水(V=10μL450μL9T)的比例配制試劑二溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配;

          2、 試劑三:臨用前加入8 mL 蒸餾水混勻,可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

          3、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1.04 mL蒸餾水配成100 μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液,2-8可保存12;

          產(chǎn)品說明:

          乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān),乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時使NAD+還原生成NADHH+,在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH反應(yīng),產(chǎn)生水溶性formazan,其在450nm處有最大吸收峰,據(jù)此可計算乳酸含量。


          注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

          需自備的儀器和用品:

          分析天平、研缽/勻漿器/超聲波細(xì)胞破碎儀、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、蒸餾水。

          操作步驟:

          一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

           

          1. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

          2. 細(xì)胞/細(xì)菌:按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量(104個):提取液一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞/細(xì)菌加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞/細(xì)菌(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

          3. 血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

          注:提取液二需緩慢加入,加入后會產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進行操作。

          二、測定步驟

          1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,波長調(diào)至450nm,蒸餾水調(diào)零。

          2、 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋:將100μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水稀釋為0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.020、0.01μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

          3、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表:

          序號

          稀釋前濃度(μmol/mL

          標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

          蒸餾水體積(µL

          稀釋后濃度(μmol/mL

          1

          100

          50

          950

          5

          2

          5

          100

          700

          0.625

          3

          0.625

          200

          200

          0.3125

          4

          0.3125

          200

          200

          0.15625

          5

          0.15625

          200

          200

          0.078

          6

          0.078

          200

          200

          0.039

          7

          0.039

          200

          200

          0.020

          8

          0.020

          200

          200

          0.010

          實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需50µL標(biāo)準(zhǔn)溶液

          3、加樣表:(按順序?qū)⑾铝性噭┘釉?/span>EP管中)

          試劑名稱

          測定管

          對照管

          標(biāo)準(zhǔn)管

          空白管

          樣本(μL

          50

          50

          -

          -

          標(biāo)準(zhǔn)品(μL

          -

          -

          50

          -

          蒸餾水(μL

          -

          50

          -

          50

          試劑一(μL

          200

          200

          200

          200

          試劑二(μL

          50

          -

          50

          50

          試劑三(μL

          100

          100

          100

          100

          試劑四(μL

          150

          150

          150

          150

          充分混勻,于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱避光準(zhǔn)確反應(yīng)30min。

          蒸餾水(μL

          450

          450

          450

          450

          混勻后,取出全部反應(yīng)液到1mL比色皿中,于450nm處測定吸光值,分別記為A測定管,A對照管,A標(biāo)準(zhǔn)管,A空白管,計算ΔA測定=A測定管-A對照管;ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管需設(shè)置一個對照管,空白管和標(biāo)準(zhǔn)曲線只需測定1-2次。

          三、乳酸含量的計算

          1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

          以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸,以其對應(yīng)的吸光值ΔA標(biāo)準(zhǔn))y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,將

          ΔA測定帶入公式中得到xμmol/mL)。

          2、乳酸含量計算

          1)按照蛋白含量計算

          L-LA含量(μmol/mg prot=x×V樣本÷V樣本×Cpr=x÷Cpr

          2)按照樣本質(zhì)量計算

          L-LA含量(μmol/g 質(zhì)量)=x×V上清+V提取液二)÷W×V上清÷V提取液一)=1.1875×x÷W

          3)按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計算

          L-LA含量(μmol/104 cell=x×V上清+V提取液二)÷N×V上清÷V提取液一)=1.1875×x÷N

          4)按照液體體積計算

          L-LA含量(μmol/mL=x×V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷V提取液一+V液體)]=13.0625×x

          V樣本:加入的樣本體積,0.05mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測定V上清:提取時上清液體積,0.8mL;V提取液二:加入的提取液二體積,0.15mL;V提取液一:加入的提取液一體積,1mLN:細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量,104個;V液體:液體樣本體積,0.1mL。

          注意事項:

          1. ΔA測定的測定范圍在0.01-1之間。如果測定吸光值超過線性范圍吸光值,可以用蒸餾水稀釋樣本后再次測定,如果測定吸光值小于線性范圍吸光值,需要增加樣本量后再次測定,注意同步計算公式。

          2. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量,需另取樣本。

          實驗實例:

          1、 0.1466g小鼠肝加入1mL提取液一,冰浴勻漿后離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清后用蒸餾水稀釋兩倍,按照測定步驟操作,使用1mL比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.972-0.092= 0.880,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.365x-0.0041R2=0.9999,計算x=0.6477,按樣本質(zhì)量計算含量得:

          L-LA含量(μmol/g 質(zhì)量)= 1.1875×x÷W×稀釋倍數(shù)(2=10.493 μmol/g質(zhì)量。

          2、 0.1063g紅薯根加入1mL提取液一,冰浴勻漿后離心,0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清,之后按照測定步驟操作,使用1mL比色皿測得計算ΔΔA測定=A測定管-A對照管=0.124-0.099=0.025,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.365x-0.0041R2=0.9999,計算x=0.0213,按樣本質(zhì)量計算含量得:

          L-LA含量(μmol/g 質(zhì)量)=1.1875×x÷W=0.2382μmol/g質(zhì)量。

          3、 100μL羊血清加入1mL提取液一,離心,0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清,之后按照測定步驟操作,使用1mL比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.587-0.095=0.492,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.365x-0.0041R2=0.9999,計算x=0.3634,按照液體體積計算含量得:

          L-LA含量(μmol/mL=13.0625×x=4.748 μmol/mL

          參考文獻:

          Eolbergrová J, MacMillan V, Siesj? B K. The effect of moderate and marked hypercapnia upon the energy state and upon the cytoplasmic NADH/NAD+ ratio of the rat brain[J]. Journal of neurochemistry, 1972, 19(11): 2497-2505.

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          BC0740/BC0745 己糖激酶(HK)活性檢測試劑盒

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