目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>三羧酸循環(huán)系列>> BC5950-50T/48S異檸檬酸含量檢測試劑盒 三羧酸
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
| 貨號 | BC5950 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 異檸檬酸含量檢測 |
異檸檬酸含量檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC5950
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體750 μL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 2-8℃保存 | |
粉劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二工作液：臨用前先離心，根據(jù)樣本量按試劑二：蒸餾水=10μL：90μL（共100μL，約1T）的比例配制后使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
2、 試劑三：臨用前加入4 mL蒸餾水充分溶解，未用完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融。
3、 標準品：臨用前加入1 mL蒸餾水充分溶解成20μmol/mL異檸檬酸標準品。
4、 工作液：臨用前根據(jù)樣本量按試劑一：試劑二工作液：試劑三=750μL：100μL：50μL（共900μL，約1T）配成工作液后使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
產(chǎn)品說明：
異檸檬酸（Isocitric Acid）是檸檬酸的異構(gòu)體，在許多水果和蔬菜以及由這些原料制成的食品中發(fā)現(xiàn)了大量的異檸檬酸鹽。生物能夠利用的是D型異檸檬酸，是三羧酸循環(huán)中的一個成分。異檸檬酸在異檸檬酸脫氫酶（ICDH，EC1.1.1.41）的作用下變成a-酮戊二酸，同時NAD（P）還原為NAD（P）H，據(jù)此可以計算異檸檬酸含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、1mL石英比色皿、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體的操作步驟請見“產(chǎn)品資料"文件
注意事項：
1.最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準確性。
2.若樣本ΔA<0.005，可適當增大樣本量后測定；若樣本ΔA>1.2或A測定>1.5，可用蒸餾水稀釋上清液后測定，
注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。
3.提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定，如需測定蛋白濃度，需另取組織。
實驗實例：
1、 取0.1139g蘋果加入提取液進行冰浴勻漿，取上清后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得ΔA測定=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（0.241-0.125）-（0.066-0.059）=0.109，帶入標曲y=0.1414x-0.0466，R2=0.9991，計算x=1.100，按樣本質(zhì)量計算異檸檬酸含量得：
異檸檬酸含量（μmol/g 質(zhì)量）=1.1875×x÷W×F=11.468 μmol/g 質(zhì)量。
2、 取0.1033g橙子葉加入提取液進行冰浴勻漿，取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得ΔA測定=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（1.001-0.923）-（0.066-0.059）=0.071，帶入標曲y=0.1414x-0.0466，R2=0.9991，計算x=0.832，按樣本質(zhì)量計算異檸檬酸含量得：
異檸檬酸含量（μmol/g 質(zhì)量）=1.1875×x÷W×F=19.129 μmol/g 質(zhì)量。
3、 取500μL橙汁飲料取上清后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得ΔA測定=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（0.856-0.840）-（0.066-0.059）=0.009，帶入標曲y==0.1414x-0.0466，R2=0.9991，計算x=0.393，按液體體積量計算異檸檬酸含量得：
異檸檬酸含量（μmol/mL）=x×F=0.393 μmol/mL。
參考文獻：
[1] Kvasni Ka, Franti Ek, et al. "Determination of Isocitric Acid in Citrus Juice—A Comparison of HPLC, Enzyme Set and Capillary Isotachophoresis Methods." Journal of Food Composition & Analysis 15.6(2002):685-691.
[2] Kong, Min Jung, et al. "Mitochondrial NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase deficiency increases cisplatin-induced oxidative damage in the kidney tubule cells." Cell Death & Disease 9.5(2018):488.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
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BC5860/BC5865 甲基檸檬酸合酶（MCS）活性檢測試劑盒
異檸檬酸含量檢測試劑盒 三羧酸 異檸檬酸含量檢測試劑盒 三羧酸
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