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疏水層析填料 octyl -Sepharose 4FF 辛基-瓊脂糖凝膠 4FF
貨號(hào) :S9280
規(guī)格 :25ml
簡(jiǎn)介
丁基-瓊脂糖凝膠 4B是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠4B上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類(lèi)介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。
本品呈白色球狀凝膠,無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。
理化 特性
項(xiàng) 目 | 指 標(biāo) |
配基 | 丁基 |
基質(zhì) | 4% 交聯(lián)瓊脂糖凝膠 |
形狀 | 球形 |
粒徑 | 45~165 µm |
配基密度 | 6-14 µmol/ml 介質(zhì) |
高流速(25℃) | 100KPa 下 50 cm/h * |
耐壓 | 0. 1MPa |
工作溫度 | 4~40℃ |
pH 適用范圍 | 4~8(短時(shí)間 ,在位清洗) ;4~8(長(zhǎng)時(shí)間 |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 以下溶液中穩(wěn)定: pH4~8 中穩(wěn)定;0.1% triton 水溶液和 1%MOPS 溶 液中穩(wěn)定;5%甲醛中基本穩(wěn)定 |
*柱子:內(nèi)徑16mm、柱長(zhǎng)10cm,柱床高5cm,25℃,流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl。
三 、 適用范圍
丁基-瓊脂糖凝膠 4B是一種疏水層析介質(zhì),利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。用于生物大分子的純化分離。
四 、 保存條件
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在 4℃~30℃(保存溶液為 20% 乙醇+0.1M 醋酸鈉) ,通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過(guò)的柱子貯存在 4℃(20% 乙醇) 。
保質(zhì)期:5 年。
五 、 操作步驟 :
1 、 裝柱
(1)讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
(2)根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉 20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1 的比例)配成勻漿。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜) ,務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
(4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
(5)打開(kāi)蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的 1.33 倍的流速流過(guò),使柱床穩(wěn)定。用 2~3 倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2 、 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,到流出液電導(dǎo)和 pH 不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如 0.02~0.05mol/L 的 PBS 加 1~2.5mol/L(NH4)2SO4 等。
3 、 上樣
(1)樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。
(2)一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì),再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)物。
(3)介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng),介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。
4 、 洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如 0.02~0.05mol/L 的 PBS。
5 、 再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗 10 倍以上柱體積,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活蛋白質(zhì)或脂類(lèi)物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
6 、 在位清洗
(1)對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可以用 2M Nacl 去除。
(2)對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類(lèi),可用 1M NaOH 去除。
(3)對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類(lèi)等,用 4~10 倍柱體積的 70%乙醇或 30%異丙醇清洗,但 要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后,用少 3 倍緩沖液平衡柱子。
7 、 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。
8 、 去熱源
用 0.5M 的氫氧化鈉清洗柱子 5~6 小時(shí)或用 0.1M 的氫氧化鈉 24 小時(shí)?;蛴靡韵路椒ú襟E去除:
(1)2 倍柱體積的 70%乙醇;
(2)2 倍柱體積 50mM Tris-HCl pH7.5;
(3)1 倍柱體積 4M 尿素;
(4)3 倍柱體積的 Tris 緩沖液+0.1M NaCl;
以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。
9 、 消毒
用 0.5~1M NaOH 室溫下洗 8~10 倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。
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