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更新時(shí)間:2024-07-20 21:00:06
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Na+k+ ——ATP酶活性檢測(cè)試劑盒 常量法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣 產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價(jià)格:240
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨
關(guān)鍵字:ATP酶活性檢測(cè)試劑盒|ATP檢測(cè)試劑盒|Na+k+ ——ATP檢測(cè)試劑盒|試劑盒
簡(jiǎn)要介紹:
Na+K+- ATP酶廣泛分布于植物、動(dòng)物、微生物和細(xì)胞中,可催化ATP水解生成ADP和無(wú)機(jī)磷。
Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷,通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)確定ATP酶活性。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 4mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×2支,-20℃保存。用時(shí)每支加1mL蒸餾水,現(xiàn)用現(xiàn)配。用不完的試劑-20℃可保存一周。
試劑四:液體2mL×1 瓶,4℃保存。
試劑五:粉劑×1 瓶,4℃保存。用時(shí)加入3mL雙蒸水, 4℃保存。
試劑六:粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入15mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。
試劑七:粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入15mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。
試劑八:液體15mL×1 瓶,室溫保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:10μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 1mL×1支,4℃保存。
0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制:將標(biāo)準(zhǔn)品 20倍稀釋?zhuān)慈?/span> 0.1mL標(biāo)準(zhǔn)品加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制:按H2O:試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若變色則試劑失效,若是藍(lán)色則為磷污染,定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意:配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
產(chǎn)品說(shuō)明:
Na+K+- ATP酶廣泛分布于植物、動(dòng)物、微生物和細(xì)胞中,可催化ATP水解生成ADP和無(wú)機(jī)磷。
Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷,通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)確定ATP酶活性。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品酶液的制備:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)660nm,蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)(在EP管中加入下列試劑)
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
試劑一(μL) | 130 | 90 |
試劑二(μL) | 80 | 80 |
試劑三(μL) | 40 | 40 |
試劑四(μL) | 40 | |
樣品(μL) | 200 | |
混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)準(zhǔn)確水浴10min | ||
試劑五(μL) | 50 | 50 |
樣品(μL) | 200 | |
混勻,4000g,常溫離心10min,取上清液 |
3定磷(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑)
空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
0.5μmol/ml標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液(μL) | 100 | |||
上清液(μL) | 100 | 100 | ||
蒸餾水(μL) | 100 | |||
定磷試劑(μL) | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻,40℃水浴10 min,冷卻室溫,在 660nm處比色。
三、計(jì)算
1、血清(漿)Na+K+-ATPase活力的計(jì)算:
定義:規(guī)定每小時(shí)每毫升血清(漿)中Na+K+- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(U/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V總÷V樣÷T=7.5×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中Na+K+- ATPase活力的計(jì)算:
(1)按蛋白濃度計(jì)算:
定義:規(guī)定每小時(shí)每毫克組織蛋白中Na+K+- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(U/ mg prot)= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V總÷(Cpr×V樣)÷T =7.5×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
定義:規(guī)定每小時(shí)每克組織中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(U/g鮮重)= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=7.5×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)計(jì)算:
定義:規(guī)定每小時(shí)每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(U/104cell)= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.5μmol/mL;V總:酶促反應(yīng)總體積,0.5mL;V樣:加入樣本體積,0.2mL ;V樣總:加入試劑一體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1/6小時(shí);Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
注意事項(xiàng):
1、由于每一個(gè)樣都必須做對(duì)照,本試劑盒50管保證測(cè) 24份Na+K+-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格無(wú)磷。
3、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。
相關(guān)文獻(xiàn):
《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen, Ying Zhao, Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070
《Transcriptomic analysis reveals effects of fucoxanthin on intestinal glucose transport》 作者:Wanxiu Cao,Jing Li,Yaoxian Chin,Robert W.Li, Changhu Xue,Qingjuan Tang 期刊:Journal of Functional Foods 影響因子:3.197 PMID:
Na+k+ ——ATP酶活性檢測(cè)試劑盒 常量法
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