產(chǎn)品名稱: 大鼠巨嗜細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞因子(MDC)ELISA試劑盒
保存與運(yùn)輸:短期2-8℃
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨供應(yīng)
一、標(biāo)本的收集和保存
用于ELISA測(cè)定的標(biāo)本zui為常用的是血清(漿),有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測(cè)目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集,要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4~6點(diǎn)之間,會(huì)有一峰值出現(xiàn):生長(zhǎng)激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放,因此,在測(cè)定此類(lèi)激素時(shí),有必要在密切相連的時(shí)間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測(cè)定值。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí),血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測(cè),應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測(cè)。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測(cè)的血清標(biāo)本的收集則沒(méi)有時(shí)間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面:
(1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
(3)血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
(5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
二、試劑準(zhǔn)備
在實(shí)驗(yàn)室,對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太注意,通常的做法是,在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問(wèn)題,其直接的后果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是,在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測(cè)定要求。
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