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        1. 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

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          人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)

          參  考  價(jià):面議
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          產(chǎn)品型號(hào)

          品牌其他品牌

          廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

          所在地上海市

          更新時(shí)間:2018-07-25 15:50:02瀏覽次數(shù):2382次

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          人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞HK-2)

          貨號(hào):HUCL-013

           

          細(xì)胞介紹

          該細(xì)胞屬源于正常腎的近曲小管細(xì)胞,通過導(dǎo)入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉(zhuǎn)染外生包裝細(xì)胞Psi-2,Psi-2細(xì)胞產(chǎn)生的病毒再去感染兼嗜性包裝細(xì)胞系PA317,最后將PA317產(chǎn)生的病毒顆粒導(dǎo)入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細(xì)胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418篩選轉(zhuǎn)導(dǎo)克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細(xì)胞來源于單克隆。PCR檢測(cè)證實(shí)HK-2細(xì)胞基因組中含有E6/E7基因。

           

          細(xì)胞特性

          1) 來源:正常

          2) 形態(tài)上皮細(xì)胞

          3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

          4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

          5) 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

           

          運(yùn)輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,1000RPM,常溫條件,離心5min后潔凈操作臺(tái)棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

           

          細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                                 

          細(xì)胞培養(yǎng)步驟

          一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

          1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H,GIBCO,貨號(hào)12800017,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。(DMEM液體培養(yǎng)基:GIBCO,11995-065)。

          2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

          3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)液氮儲(chǔ)存。

          二. 細(xì)胞處理

          1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中,加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

          2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

          對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

          1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2。

          2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

          3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

          4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

          3)細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進(jìn)行凍存

           

          注意事項(xiàng):

          1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

          2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

                           大鼠心肌細(xì)胞(H9c2)細(xì)胞培養(yǎng)說明書    

           

          倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞

          注意事項(xiàng):$r$n1. 收到倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存

          倉(cāng)鼠肺細(xì)胞

          注意事項(xiàng):$r$n1. 收到倉(cāng)鼠肺細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管

          人急性淋巴白血病細(xì)胞

          注意事項(xiàng):$r$n1. 收到人急性淋巴白血病細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干

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