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        1. 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司

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          甲氧芐氨嘧啶檢測試劑盒

          參   考   價:面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          產(chǎn)品型號:

          品       牌:研域生物

          廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

          所  在  地:上海市

          更新時間:2024-05-13 09:13:57瀏覽次數(shù):1464

          聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)
          甲氧芐氨嘧啶檢測試劑盒的宗旨是以更優(yōu)服務(wù)、更高品質(zhì)、更低價格、更快供貨的“四更"要求為國內(nèi)廣大科研用戶提供更為完善的產(chǎn)品供應(yīng)和售后服務(wù),力求工作*,在處理客戶的咨詢、訂購、售后服務(wù)、等方面追求更專業(yè)、更快捷。

          本產(chǎn)品僅用于科研,不用于臨床

          甲氧芐氨嘧啶檢測試劑盒使用說明書(酶聯(lián)免疫法)

          1 原理及用途
          本試劑盒采用競爭ELISA方法檢測組織、飼料、尿樣和血清等樣品中的甲氧芐氨嘧啶(Trimethoprim,TMP),試劑盒由預(yù)包被甲氧芐氨嘧啶抗體的酶標(biāo)板、TMP酶標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的甲氧芐氨嘧啶和TMP酶標(biāo)記物競爭酶標(biāo)板上預(yù)包被的甲氧芐氨嘧啶抗體,用TMB底物顯色后,樣本吸光度值與樣本甲氧芐氨嘧啶含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中甲氧芐氨嘧啶的殘留量。
          甲氧芐氨嘧啶檢測試劑盒技術(shù)指標(biāo)
          2.1 試劑盒靈敏度:0.015ppb(ng/ml)
          2.2 反應(yīng)模式:37℃,45min~15min
          2.3 檢測下限:
          飼料……………………………………0.8ppb
          組織(魚/蝦/肉/肝臟/腎臟)………0.2ppb
          血清/尿液/血漿………………………0.2ppb
          2.4 交叉反應(yīng)率:
          甲氧芐氨嘧啶…………………………100%
          磺胺吡啶……………………………<0.1%
          磺胺…………………………………<0.1%
          磺胺嘧啶……………………………<0.1%
          磺胺異噁唑…………………………<0.1%
          磺胺噻唑……………………………<0.1%
          磺胺甲基嘧啶………………………<0.1%
          磺胺多辛……………………………<0.1%
           2.5 樣本回收率:
          飼料……………………85%±10%
          組織(魚/蝦/肉/肝臟/腎臟)………85±15%
          血清/尿液/血漿………………………85±10%
          3 試劑盒組成
          酶標(biāo)板……………………………96孔
          標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml
          0ppb、0.015ppb、0.045ppb、0.135ppb、0.405ppb、1.215ppb
          高標(biāo)準(zhǔn)液:100ppb…………………1ml
          酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml
          底物液A(白蓋)……………………6ml
          底物液B(黑蓋)……………………6ml
          終止液(黃蓋)………………………6ml
          2×復(fù)溶液………………………50ml
          20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
          說明書…………………………………1份
          4 需要的器材和試劑
          4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
          4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
          4.3 試劑:無水甲醇、正己烷、鹽酸、氫氧化鈉
          樣本前處理
          5.1 樣本處理前須知:
          實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
          5.2 配液:
          配液1:1×復(fù)溶液
              將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋。
          配液2:0.1M鹽酸
              取濃鹽酸10ml加入到1200ml離子水中。
          配液3:1M氫氧化鈉
              取氫氧化鈉4g加入到100ml離子水中。
          5.3 樣本前處理步驟:
          5.3.1 飼料處理方法 
          1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加20ml 0.1M鹽酸,振蕩15分鐘,室溫3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
          2)取1ml上清到1.5ml離心管,加入55ul 1M氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值到6-8,混勻(針對不同的飼料樣品可以調(diào)節(jié)1M氫氧化鈉的用量),室溫3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
          3)取0.5ml上清到另一1.5ml離心管,加入0.5ml的1×復(fù)溶液,混勻;
          3)取50μl進(jìn)行分析。
              樣本稀釋倍數(shù):20    檢測下限:0.8ppb
          5.3.2 組織(魚/蝦/肉/肝臟/腎臟)處理方法 
          1)取除去脂肪的勻漿組織2g于50ml離心管中,加入6 ml無水甲醇和2ml正己烷,zui大速度渦旋振蕩5分鐘;
          2)室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,去除上層正己烷層,移取0.5ml下層清液到潔凈玻璃試管試管(避免觸碰脂肪層);
          3)在50-60℃下氮?dú)獯蹈苫蛘舾蓸悠罚?br />4)加入400ul的1×復(fù)溶液和500ul正己烷,zui大速度渦旋振蕩1分鐘;
          5)轉(zhuǎn)入1.5ml離心管,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,去除上層正己烷層,移取50ul下層清液進(jìn)行分析。
              樣本稀釋倍數(shù):5    檢測下限:0.2ppb
          5.3.3 尿液/血清/血漿處理方法
          1)取0.5 ml 樣品,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;
          2)取50µl上清液,加入200µl 1×復(fù)溶液,混勻;
          3)取50µl用于檢測。
              樣本稀釋倍數(shù):5    檢測下限:0.2ppb
          (如果需要,可以加大1×復(fù)溶液的用量來加大稀釋倍數(shù))
          6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
              將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
          實(shí)驗(yàn)開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
          6.1 編    號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
          6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,37℃反應(yīng)45分鐘。
          6.3 洗    滌:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
          6.4 顯    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光顯色15分鐘。
          6.5 終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
          6.6 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
          7 結(jié)果分析
          7.1 百分吸光率的計(jì)算
              標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
           百分吸光度值(%)=
          A
          ×100%
          A0
          A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
          A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
          7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
              以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。
              若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索取)
          8 注意事項(xiàng)
          8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
          8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
          8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
          8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
          8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
          8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)。
          8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
          貯藏及保存期
          儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
          保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

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