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全波長酶標(biāo)儀的原理與應(yīng)用
點擊次數(shù)：5067 發(fā)布時間：2016-12-22
全波長酶標(biāo)儀的原理與應(yīng)用
酶標(biāo)儀（Microplate Reader）是對酶聯(lián)免疫檢測（EIA）實驗結(jié)果進行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)是通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測抗體或抗原的濃度。酶標(biāo)儀實際上就是一臺變相的光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同。
一、酶標(biāo)儀的工作原理
使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。
光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔極中的待測標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號.電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算，zui后由顯示器和打印機顯示結(jié)果. 微處理機還通過控制電路控制機械驅(qū)動機構(gòu)X方向和Y方向的運動來移動微孔板，從而實現(xiàn)自動進樣檢測過程.而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動微孔板進行檢測，因此省去了X,Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡單.
微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液.
光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光，但對綠色不吸收，反射出來，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。
隨著檢測方式的發(fā)展，擁有多種檢測模式的單體臺式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀，可檢測吸光度（Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光（TRF)、熒光偏振（FP)、和化學(xué)發(fā)光（Lum)。
酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長，而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長進行檢測。
二、酶標(biāo)儀的應(yīng)用
酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，特別在近幾年中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng) 用，使得酶標(biāo)儀在繁殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛，同時促進了繁殖健康技術(shù)水平提高。目前在國內(nèi)血站臨床試驗室中酶標(biāo)儀成為ELISA測定的重要工具。在農(nóng)業(yè)中利用酶標(biāo)儀研究酚氧化酶，為開發(fā)以該酶為靶標(biāo)的新型害蟲控制劑提供理論依據(jù)。伏馬菌素是zui近發(fā)現(xiàn)的一族主要由幾種真菌產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)相關(guān)的毒素代謝產(chǎn)物，該毒素已被世界衛(wèi)生組織列為近年來首先進行研究的幾種霉菌毒素之一。因此快速、的檢測伏馬菌素便顯得尤為重要。在450nm或630nm的濾鏡下使用酶標(biāo)儀對微孔板進行光學(xué)測量，可以檢測伏馬菌素的含量，在食品安全方面有著重要的應(yīng)用。生長曲線一般指菌落總數(shù)CFU/mI?；蛘呔淇倲?shù)的對數(shù)log CFU/ml。隨時間變化曲線，可用來展示微生物生長情況和新陳代謝規(guī)律。目前通過分光光度計測定菌懸液時存在即時性差、操作繁瑣、易污染等缺點，由于酶標(biāo)儀是一種快速、準(zhǔn)確、高通量的儀器，所以我們總會選擇使用酶標(biāo)儀來進行菌懸液OD值的測定，來提高工作效率，節(jié)約時間。