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          無血清培養(yǎng)很難?選對微孔板可以幫大忙

          閱讀:160      發(fā)布時間:2024-8-23
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          轉(zhuǎn)染,是真核細胞主動或被動導入外源基因片段的過程,研發(fā)人員通過該技術研究基因、觀測蛋白表達,亦可以特異性增強/抑制轉(zhuǎn)染細胞中的基因表達。

           

          細胞轉(zhuǎn)染分為瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時轉(zhuǎn)染的外源基因不整合入細胞基因組,因此表達時間有限,不能傳給子代細胞;穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是通過病毒載體等方法將外源性DNA/基因?qū)爰毎?,并整合至細胞基因組,參與細胞基因組復制,可經(jīng)過篩選得到長期穩(wěn)定表達的細胞株。

           

          正常培養(yǎng)基中的血清含有核酸酶,會降解外源DNA,此外,血清中其它不確定成分或蛋白因子易與核酸形成復合物,影響轉(zhuǎn)染效率。因此,使用無血清或低血清的培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng),并在轉(zhuǎn)染復合體形成的過程中嚴格限制血清的使用,可以保證轉(zhuǎn)染的有效性。

           

          在無血清環(huán)境中,細胞的活力、貼壁能力和增殖能力下降,為了減少無血清環(huán)境給細胞造成的負面影響,BRAND研發(fā)出經(jīng)特殊修飾的細胞培養(yǎng)板表面,cellGradeTM premium表面支持細胞貼壁,并提高轉(zhuǎn)染后的細胞增殖量。


          不同表面處理的細胞培養(yǎng)板

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          不同的細胞培養(yǎng)板對比試驗

           

          狀態(tài)良好的HEK293.EBNA細胞以相同數(shù)量種板至BRAND cellGradeTM premium的黑色、底部透明的96孔培養(yǎng)板中,和另外2個廠家同類型的培養(yǎng)板做對比。細胞種板培養(yǎng)24小時后,用每孔200 ng的GFP編碼質(zhì)粒-DNA pEGFP-C1轉(zhuǎn)染細胞,轉(zhuǎn)染試劑為40 kDa聚乙烯亞胺(PEI 40),DNA:PEI=1:3,72小時后,使用電動移液器以相等低速移取并棄去培養(yǎng)基,并用200 μL PBS洗板2次,檢測ex485/em535 nm處的剩余相對熒光單位(RFU)。

          本實驗控制了細胞品質(zhì)、培養(yǎng)條件、接種量、轉(zhuǎn)染條件、檢測條件等的一致性,唯一的變量是采用不同廠家表面處理的細胞培養(yǎng)板,結(jié)果如圖2所示,從中可以看出,BRAND cellGradeTM premium表面處理的細胞培養(yǎng)板對轉(zhuǎn)染GFP表達細胞的生長、貼附和增殖有良好的促進效果。


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          轉(zhuǎn)染細胞HEK293.EBNA GFP相對熒光單位結(jié)果

           

          選對微孔板,讓你的實驗更簡單!

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