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          中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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          選擇倒置顯微鏡與熒光顯微鏡考慮幾點(diǎn)

          時(shí)間:2023/8/18閱讀:656
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          熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 對(duì)被檢物體來(lái)說(shuō),熒光產(chǎn)生方式有兩種:自發(fā)熒光,經(jīng)過(guò)紫外照射直接發(fā)出熒光;繼發(fā)熒光,被觀察物體經(jīng)過(guò)熒光染料處理之后,經(jīng)過(guò)紫外光照射才能發(fā)出熒光。 細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后產(chǎn)生自發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)出繼發(fā)熒光。 熒光顯微鏡利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源,經(jīng)過(guò)濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光(紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm)作為激發(fā)光、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,再通過(guò)物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察。 這樣在強(qiáng)烈的對(duì)襯背景下,即使熒光很微弱也易辨認(rèn),敏感性高,主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究。

          熒光顯微鏡分為透射式和落射式兩類,前者較為原始,后者較為*。 兩類熒光顯微鏡的基本構(gòu)建相似,主要區(qū)別為:透射式的激發(fā)光透過(guò)標(biāo)本,標(biāo)本整體產(chǎn)生熒光,熒光再進(jìn)入物鏡,放大倍數(shù)越高,熒光越弱;落射式的激發(fā)光投射在標(biāo)本表面,標(biāo)本表面產(chǎn)生熒光,熒光再進(jìn)入物鏡,放大倍數(shù)越高,熒光越強(qiáng),適于進(jìn)行高倍觀察。 熒光顯微鏡主要構(gòu)件有汞燈光源、激發(fā)濾板、分色鏡(落射式)、壓制濾板、暗場(chǎng)聚光鏡(透射式)等。此外,由于汞燈發(fā)熱嚴(yán)重,大多還裝有吸熱濾鏡。 部分熒光顯微鏡還有相差物鏡和環(huán)狀光闌,因此可以進(jìn)行相差觀察。 還有的熒光顯微鏡采取倒置構(gòu)架,又是倒置顯微鏡,等等。


          此外,上述顯微鏡都可以通過(guò)安裝CCD組裝成數(shù)碼顯微鏡,它是將顯微鏡看到的實(shí)物圖像通過(guò)數(shù)模轉(zhuǎn)換,使其成像在計(jì)算機(jī)上。 從而,我們可以對(duì)微觀領(lǐng)域的研究從傳統(tǒng)的普通的雙眼觀察到通過(guò)顯示器上再現(xiàn),從而提高了工作效率。

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