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Cisbio Bioassays公司 HTRF 技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：8607 發(fā)布時(shí)間：2012-11-20
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Cisbio Bioassays公司所銷售的基于HTRF技術(shù)的產(chǎn)品包括：IP1, cAMP, Cellul’erk 以及Tag-lite™細(xì)胞表面受體平臺。這些業(yè)務(wù)將會通過IBA集團(tuán)旗下的IBA中國分公司（www.htrf-china.cn）來操作。為了在亞洲市場拓展應(yīng)用于癌癥診斷和治療方面的放射藥物產(chǎn)品、儀器和方法, IBA集團(tuán)于2007年建立了IBA中國公司 上海起福公司專注于為制藥和生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室提供相關(guān)商品。 價(jià)格查詢請上www.78bio.com
HTRF 技術(shù)介紹
HTRF（均相時(shí)間分辨熒光）是用來檢測均相體系中待測物的一種zui常用的方法，是用來研究藥物靶標(biāo)的理想的平臺。這種技術(shù)結(jié)合了熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET） 和時(shí)間分辨技術(shù)（TR）。在TR-FRET實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)供體和受體相離很近時(shí)，在供體和受體之間會有熒光共振能量轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生信號。采用雙波長檢測能夠顯著減小緩沖液和培養(yǎng)基的干擾，zui終的信號跟產(chǎn)物形成的量成比例。
HTRF技術(shù)被廣泛應(yīng)用于基于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和生化實(shí)驗(yàn)的藥物研發(fā)的不同階段，從實(shí)驗(yàn)開發(fā)，lead到hit，高通量篩選（HTS），到臨床前研究。這是一種很靈敏且穩(wěn)定的技術(shù)，可以使用384和1536孔板。自從10年前HTRF技術(shù)進(jìn)入藥物研發(fā)領(lǐng)域以來，研究者采用該技術(shù)加快了很多基于抗體的研究，包括GPCR（配體結(jié)合，受體二聚化，cAMP 和IP-1 的檢測，以及磷酸化ERK的定量）, 激酶，細(xì)胞因子和生物標(biāo)志物，生物過程（抗體和蛋白生產(chǎn)），以及蛋白和蛋白，蛋白和多肽，蛋白和DNA/RNA相互作用的實(shí)驗(yàn)。HTRF技術(shù)也可以取代大部分ELISA，因?yàn)镠TRF具有同等的檢測范圍和檢測極限，而且更節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，并且不需要洗板的步驟。
HTRF也是基于TR-FRET的化學(xué)技術(shù),但它的許多特點(diǎn)把它與其他TR-FRET產(chǎn)品區(qū)分開來。其中一個(gè)特點(diǎn)就是由于使用了鑭系元素，從而具有非常長的半衰期（銪和鋱），鑭系元素與絡(luò)合的穴相結(jié)合，這種結(jié)合的穴狀物與其他所有TR-FRET產(chǎn)品使用的螯合技術(shù)相比能增加實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性，另外使用化的比值測量能矯正干擾因素。其他HTRF ®技術(shù)的特點(diǎn)包括：
- 均質(zhì)性（不需要洗板）
- 低背景
- 實(shí)驗(yàn)體積的小型化很簡捷
- 化合物和培養(yǎng)基的干擾小
- 對一些添加劑如DMSO和EDTA的耐受性
- 與許多讀扳機(jī)相兼容
總體而言，HTRF在生物分子檢測和定量方面是相當(dāng)靈敏和穩(wěn)定的技術(shù)，可以廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)領(lǐng)域.
詳細(xì)技術(shù)特點(diǎn)
穴與螯合物
穴的形成是將一個(gè)陽離子納入到一個(gè)立體籠中?；\能收集光然后將能量轉(zhuǎn)移到核心的鑭系元素。這個(gè)大環(huán)的這些性質(zhì)有利于跟鑭系元素緊密相連，這種不可破的連接會形成異常穩(wěn)固的復(fù)合體。這種穴結(jié)構(gòu)能抵抗一些特殊的實(shí)驗(yàn)條件如大量存在的陽離子（Mg2 +和Mn2 +等），螯合物（EDTA），溶劑或者溫度。從HTRF 能應(yīng)用到臨床診斷（TRACE®技術(shù)和Kryptor®工作站技術(shù)）就能看出它也適用于濃度高的血清（50%）。在讀板前或者孵育時(shí)加入氟離子能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)對大量化合物的抗干擾性。
以鈾氨基丁三醇穴（TBP鈾）為例，雙吡啶的一部分增加活化參數(shù)達(dá)到大約25-30kcal/mole 的ΔG*。因此穴結(jié)構(gòu)分子能被用于惡劣的化學(xué)條件，例如在固相肽類合成過程中，穴結(jié)構(gòu)分子在存在的固相化學(xué)和反相色譜中非常穩(wěn)定，而不用考慮鈾會從籠中分離。作為對比的是螯合物躍遷很容易達(dá)到0-10 kcal/mole的ΔG*，例如羧酸根部分質(zhì)子化。這就解釋了為什么螯合物跟穴結(jié)構(gòu)分子不一樣，在酸性介質(zhì)中不穩(wěn)定，稀有金屬離子容易被介質(zhì)中的離子如錳置換。
時(shí)間靈活和實(shí)驗(yàn)安全
如果儀器壞了，在一段時(shí)間之后仍然可以讀板。HTRF結(jié)果能持續(xù)7天以上保持穩(wěn)定且較大的實(shí)驗(yàn)窗口。
動(dòng)力學(xué)研究
穴沒有光漂白性，多次讀數(shù)后信號沒有損失。因此能按照需要的次數(shù)去讀，這就給許多實(shí)驗(yàn)的動(dòng)力學(xué)檢測提供了可能。
靈活的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ?br />許多化學(xué)和生物添加劑，如帶血清的培養(yǎng)液，牛血清白蛋白，二甲基亞砜，去污劑，酶的淬滅劑（EDTA），對實(shí)驗(yàn)測量沒有干擾因而給實(shí)驗(yàn)提供了很大的靈活性。