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緩沖液如何配制
點(diǎn)擊次數(shù)：8513 發(fā)布時(shí)間：2013-9-24
1包被緩沖液，
（1）碳酸鹽緩沖液（PH9.6 +0.2 0.05M） 《激素酶免疫測定技術(shù)》石老師編著
Na2CO31.59g
NaHCO3 2.93g
加蒸餾水至1000ml。
（2）tris緩沖液（0.05mol/L）50ml 0.1mol/L
（Tris）溶液與x ml 0.1mol/L 鹽酸混勻后，加水稀釋至100ml 《酶免疫測定技術(shù)》楊立國等編著
各種pH值的Tris緩沖液的配制 | |
所需pH值（25℃） | 0.1mol/L HCl的體積 |
7．1 | 45．7 |
7．2 | 44．7 |
7．3 | 43．4 |
7．4 | 42．0 |
7．5 | 40．3 |
7．6 | 38．5 |
7．7 | 36．6 |
7．8 | 34．5 |
7．9 | 32．0 |
8．0 | 29．2 |
8. 1 | 26.2 |
8.2 | 22.9 |
8.3 | 19.9 |
8.4 | 17.2 |
8.5 | 14.7 |
8.6 | 12.4 |
8.7 | 10.3 |
8.8 | 8.5 |
8.9 | 7.0 |
某一特定pH值的0.05mol/L Tris緩沖液的配制：將50ml 0.1mol/L Tris堿溶液與上表所示相應(yīng)體積（單位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水將體積調(diào)至100ml
0.1mol/L鹽酸的配置： 買來的濃鹽酸是 12 mol/L的，以配制1L 0.1mol/L的鹽酸為例： 先用量筒量取8.3 mL的濃鹽酸倒入容量瓶，然后將溶液加蒸餾水稀釋至體積為1 L，此時(shí)的溶液就是0.1mol/L的鹽酸。
0.1mol/Ltris的配置：0.1 mol/L溶液為12.114 g/L 則 配制600mlTris緩沖液的方法： 三羥甲基氨基甲烷： 3.6g 濃鹽酸： 2.09ml
|
3）0.02mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.4）
磷酸二氫鉀 0.2g
磷酸氫二鈉 2.90g
氯化鈉 8g
加去離子水定容到1000ml。
2洗滌緩沖液（pH7.4 0.15mol/L） 《激素酶免疫測定技術(shù)》石老師編著
0.05%Tween-20 0.5ml
加在PBS緩沖液1000ml中。
PBS緩沖液：
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H2O 2.9g
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
加蒸餾水至1000ml。
3測定緩沖液（Ph7.0 含0.87﹪NaCl 和0.1﹪BSA的0.1M磷酸緩沖液）用于標(biāo)準(zhǔn)孕酮，孕酮酶標(biāo)物及奶樣的稀釋。 《激素酶免疫測定技術(shù)》石老師編著
Na2HPO4·12H2O 21.85g
NaH2PO4·2H2O 6.08g
NaCl 8.70g
BSA 1.00g
溶于1000mL蒸餾水中
4封閉緩沖液
牛血清白蛋白（BSA） 2% 2g
（或5%脫脂奶粉）加洗滌緩沖液100 ml。
0.05mol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.6）+2.0%BSA
2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸鹽緩沖液溶解定量至100ml
5底物緩沖液（pH5.4）磷酸鹽-檸檬酸緩沖液
0.2M Na2HPO4（無水28.4g/L，帶12結(jié)晶水71.7g/L） 取25.7ml
0.1M 檸檬酸（無水19.2g/L，帶1結(jié)晶水21.01g/L） 取24.3ml
加蒸餾水至100ml。
或
檸檬酸（C6H8O7·H2O） 0.47g
Na2HPO4·12H2O 2.00g
6（1） TMB（四甲基聯(lián)苯胺）顯色液（藍(lán)色）
A液（3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺，TMB）:稱取TMB20mg溶于10ml無水乙醇中，*溶解后，加雙蒸水至100ml。
B液（0.1mol/L檸檬酸-0.2mol/L磷酸氫二鈉緩沖液，pH5.0-5.4）:稱取Na2HPO4·12H2O14.34g，檸檬酸1.87g溶于180ml雙蒸水，加0.75%過氧化氫尿素1.28ml，定容至200ml，調(diào)pH至5.0-5.4。
將A液和B液按1：l混合后即成TMB-過氧化氫尿素應(yīng)用液
或
TMB（2mg/ml水） 0.05ml
底物緩沖液 0.95ml
30% H2O2 0.001ml
總體積1ml。
（2）OPD（鄰苯二胺）顯色液（黃棕色）（現(xiàn)配避光）
OPD（干粉） 0.004g
底物緩沖液 10ml
30% H2O2 0.015ml
總體積10ml。
（3）TMBS底物液（用于顯色） 《激素酶免疫測定技術(shù)》石老師編著
10mg四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽（TMBS）的二甲基亞砜溶液，用底物緩沖液配成0.2mg/ml的TMBS底物液。用前加H2O2溶液30﹪左右。
7 終止液 2mol/LH2SO4 用于終止反應(yīng)
在178.3ml水中，逐滴加入濃硫酸（18M，約98%）21.7ml，邊加邊搖。（濃H2SO4：蒸餾水=1:9）
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