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如何選購ELISA試劑
點擊次數(shù)：2106 發(fā)布時間：2013-10-16
ELISA試劑盒在實驗室已 經(jīng)相當普及，絕大多數(shù)ELISA試劑盒都是用于檢測未知樣本中抗原的濃度。用試劑盒當然比自己慢慢摸條件快得多，ELISA試劑盒不僅可以讓實驗更便利， 往往還更加?，F(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進口，數(shù)量繁多令人目不暇接，怎樣才能選出zui適用的產(chǎn)品呢？首先當然得根據(jù)我們所要檢測的分子 進行檢測，除此以外也還有一些需要加以考量的因素，本文就來為您介紹一二。
1. 實驗類型
ELISA試劑盒有多種類型，不過它們都有一個共同特點，就是進行抗原捕獲。一般捕獲形 式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細胞進行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細胞，然后在膜上檢測細胞分泌的抗原形成斑點。此外，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進行ELISA 實驗。
通常人們使用雙抗夾心法進行ELISA實驗，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體 之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過有時候雙抗夾心法并不是*選擇，例如有時候抗原特別小讓兩個大抗體難以附著，又或者抗體只有 一個抗體結(jié)合位點。在上述情況下，競爭性ELISA就更為適用，這種方法是采用帶標記的純化抗原與樣本中無標記的抗原進行競爭，以結(jié)合捕獲抗體。
2. 抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實際上有時候二者結(jié)合效果更好。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進行捕獲而單抗進行檢測有時更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不論多抗還是單抗）的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點，為此我們就需要確 保捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突，就會對實驗結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題，我們可以選擇購 買“matched pair”的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗證才推薦的好組合。
3. 交叉反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就 是交叉反應(yīng)的一個因素。盡管現(xiàn)在購買源自動物的抗體越來越容易，我們?nèi)杂斜匾_認一下是否會產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA檢測 時，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實驗特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的 捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。
與此同時，了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測結(jié)果收到影響。
4. 檢測方式
如今檢測ELISA有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進行選擇。一般ELISA檢測的 是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP），而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺 DAB）。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計進行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還 可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。
上述四點展開來講都足以大做文章，因此如果您對考慮購買的ELISA試劑盒還有任何疑問，都可以直接向商家咨詢。各大商家的上也有相應(yīng)的技術(shù)資料提供，您可以從中獲取有價值的產(chǎn)品信息。
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