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        1. 上海一基實(shí)業(yè)有限公司
          中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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          大鼠層粘連蛋白(LN)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

          時(shí)間:2011/4/12閱讀:1812
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          上海一基實(shí)業(yè)有限公司是一家集經(jīng)銷批發(fā)、招商代理的有限責(zé)任公司,是一家經(jīng)國(guó)家相關(guān)部門批準(zhǔn)注冊(cè)的企業(yè)。主要經(jīng)營(yíng)ELISA試劑盒、細(xì)胞、血清、抗體、生物試劑、培養(yǎng)基、等產(chǎn)品,具體請(qǐng).
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          本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
           
          本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被大鼠層粘連蛋白(LN單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中大鼠層粘連蛋白(LN)濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中大鼠層粘連蛋白(LN含量。

          5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。
          6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對(duì)照孔不加。
          7、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min
          8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。
          9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37避光顯色15min。
          10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
          11、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。
          12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
          【大鼠層粘連蛋白(LN)Elisa試劑盒樣本要求】
          1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因?yàn)?/span>疊氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。
          2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
          3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。
          【大鼠層粘連蛋白(LN)Elisa試劑盒注意事項(xiàng)】
          1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
          2、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
          3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
          4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
          5、本試劑盒定量范圍為25-800μg/L,超過(guò)此范圍,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果(25-800μg/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
          6、若顯色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。
          7、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。
          8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。
          9、底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
           
          【大鼠層粘連蛋白(LN)Elisa試劑盒操作程序總結(jié)】
           
          準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
           

           
          加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘
           
          洗板4次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘
           
          洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
           
          加入終止液
           
          15分鐘之內(nèi)讀OD值
           
          計(jì)算
           
          【大鼠層粘連蛋白(LN)Elisa試劑盒檢測(cè)范圍
          25μg/L - 800μg/L
          【大鼠層粘連蛋白(LN)Elisa試劑盒規(guī)格】
          96人份/盒
          【大鼠層粘連蛋白(LN)Elisa試劑盒貯藏】
          2-8,避光防潮保存。
          【大鼠層粘連蛋白(LN)Elisa試劑盒有效期】
          6個(gè)月

           

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