液相色譜儀色譜柱在色譜分析系統(tǒng)中主要起著分離物質(zhì)的作用，是液相色譜的核心部件，同時(shí)也是損耗品。

樣品中所含有的鹽、脂質(zhì)、疏水蛋白質(zhì)和其它一些生物物質(zhì)都有可能與色譜柱發(fā)生相互作用，一些保留值較小的物質(zhì)如鹽類比較容易被沖出色譜柱，而一些保留性較強(qiáng)的組分，流動(dòng)相溶液不足以把這些物質(zhì)洗脫下來(lái)，多次上樣后，這些吸附在柱子表面的物質(zhì)通常就會(huì)積累在柱頭。當(dāng)這些被吸附的樣品成分累積到一定程度足以使之形成新的固定相而改變分離機(jī)理，以致樣品保留時(shí)間會(huì)出現(xiàn)不一致，或者是拖尾現(xiàn)象。

1-堵頭；2-柱頭螺絲；3-刃環(huán)；4-聚四氟乙烯O形圈；5-多孔不銹鋼燒結(jié)片；6-色譜柱管；7-色譜填料

為了延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，上一篇文章已經(jīng)提出，應(yīng)在分析柱前連接一個(gè)保護(hù)柱。YMC保護(hù)柱是內(nèi)徑為1.0mm、2.1mm、3.0mm、4.0mm，長(zhǎng)10mm或20的短柱，并且填充和分析柱相同的填料，可看作是分析柱的縮短形式，安裝在分析柱前。（注：保護(hù)柱和分析柱的填料一定要保持一致，否則可能會(huì)出現(xiàn)峰形分叉等現(xiàn)象），其作用是收集、阻斷來(lái)自進(jìn)樣器的機(jī)械和化學(xué)雜質(zhì)，以保護(hù)和延長(zhǎng)分析柱的使用壽命。一只1cm長(zhǎng)的保護(hù)柱就能提供充分的保護(hù)作用。若選用較長(zhǎng)的保護(hù)柱，可降低污染物進(jìn)入分析柱的機(jī)會(huì)，但會(huì)引起譜帶擴(kuò)張。因此選擇保護(hù)柱的原則是在滿足分離要求的前提下，盡可能選擇對(duì)分離樣品保留低的短保護(hù)柱。

1-保護(hù)柱套；2-保護(hù)柱芯；3-EK標(biāo)準(zhǔn)通用接頭；4-分析柱接頭；5-連接六通進(jìn)樣閥接頭

對(duì)硅膠基體的鍵合固定相，流動(dòng)相的pH值建議保持在2.5～7.0之間。具有值的流動(dòng)相會(huì)溶解硅膠，而使鍵合相流失。對(duì)于有機(jī)雜化硅膠基質(zhì)的色譜柱，流動(dòng)相的pH值可以拓寬至1-12，但是對(duì)于多重的條件，不建議長(zhǎng)期使用，如pH1-12，同時(shí)水相的比例在90%-100%之間。

對(duì)普通反相C18 鍵合相柱，如YMC-Pack C18和YMC-Pack Pro C18除去柱中含有的緩沖溶液鹽類或水溶性物質(zhì)時(shí)，不應(yīng)使用純水沖洗。因?yàn)镃18鍵合相像一條長(zhǎng)鏈將硅膠黏結(jié)，當(dāng)有有機(jī)溶劑存在時(shí)，其表面被流動(dòng)相潤(rùn)濕，C18長(zhǎng)鏈*展開，像海水中的海藻一樣。當(dāng)純水或緩沖溶液通過(guò)時(shí)，C18鍵合相與其不浸潤(rùn)，鍵合相表面會(huì)塌陷，從而將溶劑、樣品分子或無(wú)機(jī)鹽分子包合。此時(shí)僅用純水無(wú)法將包合物洗脫出，應(yīng)使用含5％有機(jī)溶劑的水溶液沖洗，才可清除無(wú)機(jī)鹽或水溶性物質(zhì)。對(duì)于YMC-Pack C18-AQ和YMC-Triart C18，因?yàn)樽隽颂厥獾奶幚砗托揎棧幢阍?00%水相，填料表面也不會(huì)干涸，仍然保持浸潤(rùn)狀態(tài)，因此如果需要用到高水相的條件，建議選擇合適的色譜柱。

硅膠、氧化鋁或正相鍵合相柱，應(yīng)保存在流動(dòng)相中。氰基柱不能保存在純有機(jī)溶劑(如甲醇或乙腈)中，應(yīng)保留在欲使用的流動(dòng)相中；氨基柱保存在乙腈中，而非流動(dòng)相，并且應(yīng)注意不可使用丙酮作流動(dòng)相。C18反相柱應(yīng)保存在純甲醇溶劑中，對(duì)填充高交聯(lián)度苯乙烯-二乙烯基苯共聚微球的非極性固定相也可用此法保存。

對(duì)使用時(shí)間較長(zhǎng)、柱效逐漸下降的色譜柱，可用下述方法進(jìn)行快速再生，以除去微量不潔雜質(zhì)在柱頭的聚積。

再生指導(dǎo)：色譜柱反接，不接檢測(cè)器，用下面不同極性的試劑沖洗色譜柱，每種至少20倍的柱體積

反相（C30、C18、C8、C4、C1、Phenyl、PFP）

極性樣品：Water, Methanol, THF, Methanol, water, phase

非極性樣品：isopropanol, THF, Dichloromethane, Hexane, Isopropanol, phase

正相（Diol、amino、Silica、PVA-sil、cyano）

極性樣品：Water Methanol THF Methanol Water phase

非極性樣品：Chloroform, Methanol, Dichloromethane, Heptane or Isocyanate , Isopropanol, phase