色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。
如何評(píng)價(jià)一根色譜柱的好壞呢?
主要標(biāo)準(zhǔn)也就是那些zui影響分離的因素,這些因素通常都需要比較才知道,只從柱子的粒徑、孔徑、載碳量上是看不出來的,色譜工作者zui關(guān)心的是:柱效(理論塔板數(shù))、分離度、柱壓、拖尾因子、色譜柱的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、pH使用范圍、使用壽命這幾個(gè)指標(biāo)。使用者也是主要從這幾個(gè)指標(biāo)來對比評(píng)價(jià)一根柱子的好與壞。
在填料的諸多特性中,使用者zui關(guān)心的是以這些填料裝成色譜柱后的分離效率、對溶質(zhì)的選擇性,在不同pH介質(zhì)中的穩(wěn)定性,不同批次填料間性能的重現(xiàn)性以及較適宜的操作壓力。當(dāng)用于生物樣品的分離與分析時(shí),還需要考慮柱子的樣品負(fù)載量和回收率等指標(biāo)。
通常,以的一組標(biāo)準(zhǔn)溶質(zhì)為樣品,測定它們在柱子上的理論塔板數(shù),以作為柱效的衡量指標(biāo)。
柱性能指標(biāo)包括在一定實(shí)驗(yàn)條件下(樣品、流動(dòng)相、流速、溫度)下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性,或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復(fù)性在±5%或±10%以內(nèi)。進(jìn)行柱效比較時(shí),還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。
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