ELISA原理實驗條件和技術(shù)要點:在應(yīng)用ELISA時，首先要清楚下面內(nèi)容：
1，是檢測抗體還是抗原？
2，檢測的結(jié)果是定性還是定量？
3，是否需要檢測特異抗體的類型？
4，所用抗體/單克隆抗體的親和力怎樣？
（1）檢測抗原? zui常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法，其次是競爭法。但競爭法在具體實驗中有些困難，特別是檢測微生物的抗原，因為需要標(biāo)記抗原，這對于某些抗原是很難做到的，甚至是不可能的。另外在競爭法中，酶標(biāo)記的抗原與標(biāo)本直接混合在一起，許多標(biāo)本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質(zhì)，可影響ELISA的結(jié)果。
（2）檢測抗體? 檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法，這個方法常用于檢測特異性IgG、IgA和IgM.。這個方法的*步是捕獲所需要檢測的一個種類的抗體，接下來是檢測捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測IgG時比較簡單，但不適用于檢測其他種類的抗體，因為血清中如果有特異IgG存在將與IgM或IgA等競爭結(jié)合抗原。
樣品采集：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。
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